请教:集落形成试验

具体可以看鄂征的组织培养和分子细胞学技术
 
软琼脂中的克隆形成率则反映细胞的群体依赖性和增值能力，由于培养中肿瘤细胞对于群体依赖性较低但增殖能力较高，因此克隆形成率是反映肿瘤细胞的恶性度的重要指标。
 
下面是我论文中的一部分，是我们自己改进的Protocol.各实验室窍门不一样，多问几家。
 
1).细胞培养至70%贴壁时准备试验，试验前夜更换培养液；
2). 称取两份1g 低熔点琼脂糖胶，分别置入新鲜制备的MiliQ水，配成10%和2%，高压灭菌，维持于40℃勿使冷却凝固；
3). 取少量含10%FBS的RPMI1640培养液，预热至37℃；
4). 将维持于40的10%低熔点胶溶液按10:1比例与预热至37℃RPMI1640培养液混合，取5ml，置入直径为6cm的无菌培养皿中，冷却凝固，至于37℃,5% CO2培养箱中备用；
5).  将培养中细胞用0.25%胰酶消化成单个细胞，20℃ 800′g离心15min，轻轻倒掉上清；
6). 用少量10% FBS＋RPMI1640 将细胞吹打悬起；计数；稀释500 cell/ml；
7). 将维持于40C的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与细胞悬液混合，充分混匀后取2ml注入步骤4).中制备的底层琼脂糖上；
8). 待加入的琼脂糖凝固后，置于37℃,5% CO2培养箱中；
9). 将维持于40的2% 低熔点胶溶液按10:1比例与10% FBS＋RPMI1640混合，充分混匀后取１ml注入步骤７).中制备的琼脂糖上；
10). 待加入的琼脂糖凝固后，再加入5ml10% FBS＋RPMI1640；
11). 置于37℃,5% CO2培养箱中培养7天；转化的LA795（MAGE-A3）细胞和LA795细胞各作3份；
12). 观察形成的细胞集落；并计数克隆形成率：
       
13). 两组细胞克隆形成率，以配对样本的秩和检验作统计分析；以SPSS 10.0辅助计算；P＜ 0.05视为差别有显著性的依据；