石斛兰克隆流程—外植体消毒预处理

初步摸索的一套石斛外植体克隆流程——预处理部分

时隔2年，因价值驱动，小胡决心重新操手石斛外植体克隆。

这套石斛外植体的操作方法是根据兰花花梗外植体消毒操作模拟改造过来的，经过小胡的小规模实验初步有一定效果，但还没进入真正规模化的测试，因此本文仅作参考。

介绍下预处理部分

预处理一直是外植体消毒的重头戏，对于难度较高的兰花更是如此。

这里小胡说下石斛的预处理细节：

1.选材

a.材料老嫩程度

  材料的老嫩程度很关键，小胡摸索下来，过嫩的材料是很难熬过消毒过程的，而且较嫩的材料很小，石斛一播完叶鞘基本就剩下1/3，材料越小成功概率也就越低，特别是对母株很少的更是如此。

   那么偏老的材料呢，这里小胡定义偏老的特征为明显的叶鞘老化干化（杆子部分看到白色纤维就是叶鞘老化的特征），茎部明显褶皱、失水。偏老植株问题就在消毒难度很大这里，根据老手经验，成功率在30%左右，诱导率还要再低点，所以小胡不建议用老植株来做，老植株建议作高位芽诱导，诱导出来的高位芽再做外植体克隆。

b.什么材料适合

  首先必须是新芽，新芽老嫩程度是最好的，诱导难度低，消毒难度低；其次新芽要越大越好，程度上接近封顶最后，节数越多越好，原因是，剥叶鞘后材料会剩不多，另外节是诱导无菌芽最好的部位，也是最好诱导的，所以节越多，前期可以出苗基数也越大。

c.材料使用前处理

  材料要做克隆前必须进行控水，让基质表面保持干燥，这样可以更好的减少材料带菌量。

2.剥叶鞘的技巧

  石斛进行外植体消毒，小胡还是比较建议剥叶鞘，有文献显示是进行消毒液消毒后再剥，但小胡个人认为操作难度大，而且容易消毒不彻底，所以先剥叶鞘再消毒是小胡的操作方法。

  至于叶鞘剥取操作看视频，主要是下刀不要太重导致伤口太大。

细节就这么多，下面操作看视频吧