植物组培外植体消毒详解
外植体的消毒
植物组织培养用的外植体大部分取自田间,表面上附着大量的微生物,这是
组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理,
消毒一方面要求
把材料表面上的各种微生物杀灭,
同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影
响其生长。因此,外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
(
1
)常用的消毒剂
常用的消毒剂如下表所示。理想的消毒剂应具有消毒效果好,易被无菌水冲
洗掉或能自行分解,对材料损伤小,对人体及其他生物无害,来源广泛,价格低
廉。
常用消毒剂的使用方法及效果
①酒精
酒精是最常用的表面消毒剂,以
70%~75%
酒精杀菌效果最好,
95%
或无水
酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固,
形成一层干燥膜,
阻止了酒精的继续渗
入,杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力,使菌体蛋白质变性,杀菌效果好。同时它还具有较
强的湿润作用,
可排除材料上的空气,
利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材
料的杀伤作用也很大,
浸泡时间过长,
植物材料的生长将会受到影响,
甚至被酒
精杀死,使用时应严格控制时间。但酒精不能彻底消毒,一般不单独使用,多与
其他消毒剂配合使用。
②升汞
又称氯化汞,
Hg2+
可以与带负电荷的蛋白质结合,使蛋白质变性,从而杀死
菌体。
升汞的消毒效果极佳,
但易在植物材料上残留,
消毒后需用无菌水反复多
次冲洗。升汞对环境危害大,对人畜的毒性极强,使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠
次氯酸钠是一种较好的消毒剂,它可以释放出活性氯离子,从而杀死菌体。
其消毒能力很强,不易残留,对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强,对植物材
料也有一定的破坏作用。
④漂白粉
漂白粉的有效成分是次氯酸钙
[Ca(ClO)2]
,消毒效果很好,对环境无害。它
易吸潮散失有效氯而失效,故要密封保藏。
⑤过氧化氢
也称双氧水,消毒效果好,易清除,又不会损伤外植体,常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭
这是一种广普表面活性消毒剂,对绝大多数植物外植体伤害很小,杀菌效果
好。
(
2
)消毒方法
①茎尖、茎段及叶片等的消毒
消毒前先对植物组织进行修整,去掉不需要的部分,然后用自来水冲洗。对
于一些表面不光滑或长有绒毛的材料,
可用洗涤剂清洗,
必要时用毛刷充分刷洗,
硬质材料可用刀刮。