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植物组培外植体消毒详解

 昵称46419158 2017-08-15

植物组培外植体消毒详解

 

   

 

 

 

外植体的消毒

 

    

植物组织培养用的外植体大部分取自田间,表面上附着大量的微生物,这是

组织培养的一大障碍。

因此在材料接种培养前必须要消毒处理,

消毒一方面要求

把材料表面上的各种微生物杀灭,

同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影

响其生长。因此,外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。

 

    

1

)常用的消毒剂

 

    

常用的消毒剂如下表所示。理想的消毒剂应具有消毒效果好,易被无菌水冲

洗掉或能自行分解,对材料损伤小,对人体及其他生物无害,来源广泛,价格低

廉。

 

    

常用消毒剂的使用方法及效果

 

    

①酒精

 

    

酒精是最常用的表面消毒剂,以

70%~75%

酒精杀菌效果最好,

95%

或无水

酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固,

形成一层干燥膜,

阻止了酒精的继续渗

入,杀菌效果大大降低。

 

    

酒精具有较强的穿透力,使菌体蛋白质变性,杀菌效果好。同时它还具有较

强的湿润作用,

可排除材料上的空气,

利于其他消毒剂的渗入。

但酒精对植物材

料的杀伤作用也很大,

浸泡时间过长,

植物材料的生长将会受到影响,

甚至被酒

精杀死,使用时应严格控制时间。但酒精不能彻底消毒,一般不单独使用,多与

其他消毒剂配合使用。

 

    

②升汞

 

    

又称氯化汞,

Hg2+

可以与带负电荷的蛋白质结合,使蛋白质变性,从而杀死

菌体。

升汞的消毒效果极佳,

但易在植物材料上残留,

消毒后需用无菌水反复多

次冲洗。升汞对环境危害大,对人畜的毒性极强,使用后应做好回收工作。

 

    

③次氯酸钠

 

    

次氯酸钠是一种较好的消毒剂,它可以释放出活性氯离子,从而杀死菌体。

其消毒能力很强,不易残留,对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强,对植物材

料也有一定的破坏作用。

 

    

④漂白粉

 

    

漂白粉的有效成分是次氯酸钙

[Ca(ClO)2]

,消毒效果很好,对环境无害。它

易吸潮散失有效氯而失效,故要密封保藏。

 

    

⑤过氧化氢

 

    

也称双氧水,消毒效果好,易清除,又不会损伤外植体,常用于叶片的消毒。

 

    

⑥新洁尔灭

 

    

这是一种广普表面活性消毒剂,对绝大多数植物外植体伤害很小,杀菌效果

好。

 

    

2

)消毒方法

 

    

①茎尖、茎段及叶片等的消毒

 

    

消毒前先对植物组织进行修整,去掉不需要的部分,然后用自来水冲洗。对

于一些表面不光滑或长有绒毛的材料,

可用洗涤剂清洗,

必要时用毛刷充分刷洗,

硬质材料可用刀刮。

 



     

消毒时在超净台上操作,先用

70%

酒精浸泡

10~30s

以无菌水冲洗

2~3

次,

然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度,分别采用

2%

次氯酸钠浸泡

10~15min

或用

0.1%

升汞浸

5~10min

。消毒时要不断搅动,使植物材料与消毒剂充分地接

触。

若材料有绒毛,

最好在消毒液中加入几滴

Tween-20

最后用无菌水冲洗

3~5

次。

 

    

②果实及种子的消毒

 

    

先用自来水冲洗

10~20min

,再用酒精迅速漂洗一下。果实用

2%

次氯酸钠浸

10min

,后用无菌水冲洗

2~3

次。种子则先用

10%

次氯酸钠浸泡

20~30min

,难

以消毒的可用

0.1%

升汞消毒

5~10min

。对于种皮太硬的种子,也可预先去掉种

皮,再用

4%

次氯酸钠浸泡

8~10min

 

    

③花药的消毒

 

    

用于组织培养的花药多未成熟,其外面有花萼、花瓣或颖片保护,处于无菌

状态。

消毒时将整个花蕾或幼穗用

70%

酒精浸泡数秒钟,

然后用无菌水冲洗

2~3

次,再在漂白粉中浸泡

10min

,最后用无菌水冲洗

2~3

次。

 

    

④根及底下部器官的消毒

 

    

由于这类材料生长于土壤中,表面带菌量大,消毒较为困难。可先用自来水

冲洗,

软毛刷刷洗,

用刀切去损伤及污染严重部位,

再用酒精漂洗后,

置于

0.1%

升汞中浸

5~10min

2%

次氯酸钠中浸

10~15min

,最后用无菌水冲洗

3

次。

 

    

在操作时要根据材料的大小、幼嫩、质地等差异做出判断后,再选择适宜的

消毒剂种类、

浓度和消毒时间,

切不可生搬硬套。

消毒的最佳效果应以最大限度

地杀死材料上的微生物,而又对材料的损伤最小为好

  


 

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