|
代志峰 河南大学淮河医院检验科 在生化室日常工作中，审核结果的时候你是否心中有底，能保证结果的准确可靠。众所周知，一切生化检测结果准确的前提是室间质控和室内质控在控。但是，在实验室都在控的情况下，结果就一定是准确无误的吗？ 诚然，对于目前市面上常见生化仪，如常见的日立、东芝、罗氏等，在质控在控的情况下，都已经可以保证检测结果极高的准确度和精密度。但是在特定的情况下，结果或许不是我们想当然的那样。 笔者最近遇到一个有趣的结果，机器报告CK=—67。结果显然是有问题的，酶活性不存在负值的情况。笔者随即查看项目反映曲线，本应是笔直的斜线变成了平平的直线，且达到设定吸光度（Abs=40000）上限。按照笔者经验，定是标本中CK浓度过高导致的底物耗尽，果断对标本10倍稀释，稀释后检测结果CK=1550，查看反应曲线，在测光区为一平滑曲线，符合酶促反应曲线，乘以稀释倍数后该标本结果CK=15500，然后审核并报告临床危急值。 笔者想到，是否有同仁不知道为何会出现负值，并且假如机器报告结果为正值，会不会有同仁直接审核结果而导致结果错报。针对此种情况，笔者对此例检查结果进行分析，并分享避免此种情况发生的处理经验。 在此之前，我们必须复习一下生化的常用检测方法。一种为我们最常见的检测酶的“酶学方法”，另一种为非酶检测的“终点法”，包括一点终点法和两点终点法。在此我们只讨论酶活性浓度测定方法。其按检测方法分为比色法、浊度法、分光光度计法、荧光分光光度计法、量积法、电位滴定法和生物传感器法，其中以分光光度计法最常用；按照反应时间分为定时法、连续监测法和平衡法，最常用的为连续检测法[1]。 目前临床实验室测定酶活性浓度广泛采用“分光光度计连续监测法”。其中又以“酶耦联法”应用最普遍。临床常规酶学分析所用的酶耦联法中，多以脱氢酶为指示酶，通过监测其反应物NDDH或NADPH于340nm处吸光度的变化速率来检测样本中酶的量[1]。 笔者单位生化仪器为日立7180全自动生化仪，所用试剂购自上海高宗科技有限公司，对酶检测采用连续监测法进行。举例说明，对肌酸激酶（CK）检测为在28到34点处连续监测反应中吸光度的变化率，以此计算样本中被测酶浓度，如图1。当待测酶浓度过高时，迅速耗尽试剂盒中底物，到达机器连续检测区时，酶促反应到达平台期，吸光度无变化，但是实际检测中可能出现上下浮动，因此可以出现负值或者低值。 图1 图2 对每种项目的试剂盒，厂商都会给出相应的线性范围，比如CK的线性范围为0-1500U/L。在此，笔者特意咨询试剂厂商，对于给定的线性范围是保守估计。一般情况下，超出给定线性范围2—3倍都是可以保证结果的准确性，笔者也特意对超出线性范围的标本进行稀释检测，确实与未稀释标本结果符合，因此，线性范围只是参考，对于超出线性范围的标本不一定需要稀释重测，而需要查看反应曲线，只要是线性曲线，即可保证结果的准确性。 但是以上提及的连续监测法都是在保证底物充足的情况下进行的。当标本检测酶浓度过高时，试剂盒中底物被迅速耗尽，在达到测光点之前即达平台期，此时测光点开始连续监测，吸光度前后无变化或变化极小，结果可能会出现极低值甚至负值。 图3 图4 在此，笔者反思，在临床实验室工作中，怎样保证报告结果的准确性。首先必须保证实验室室间和室内质控在控。对于待测浓度超出线性范围的情况，①大型的全自动生化仪都会有报警提示，对于报警的结果，查看反应曲线来进行相应处理②对于超出线性范围的检测结果查看其反应曲线③对于基层医院的小型生化仪，可以利用组合项目的优势，比如笔者遇到的情况，心肌酶谱全线升高，某一项目偏低，此时可以查看反应曲线，确定是真低值还是假性低值。 当然，这都是要建立在掌握酶促反应原理及检测方法的前提下，只有深入了解生化仪的检测过程，才能在实际工作中去伪存真，为临床医生报告准确可靠的值，为病人治疗提供一份力量。 参考文献 [1]府伟灵. 临床生物化学检验[M]. 人民卫生出版社, 2012. 说明：本文为中华检验医学网、检验医学微信公众平台全网首发，转载时请注明来源及原创作者姓名和单位。 |
|
|
