免疫组化的局限性

　　作者：张卫琴（合肥市妇幼保健院病理科）

　　灵敏度高、精确性和特异性是一种理想的肿瘤标记物必须具有的，但至今所发现的肿瘤标记物还没有能完全满足这些标准。某些正常细胞也分泌一些肿瘤标记物，因此肿瘤细胞学并不是单独产生一种标记物，即选用一组抗体比单一抗体更有利。在肿瘤诊断中评估免疫组化的局限性主要在抗体特异性和解释方面。在免疫组化操作中都必须有适当的阳性与阴性对照，作为技术完整性质量控制，如对照组被忽略或不理想时，免疫组化染色的结果要谨慎对待，免疫组化的正确结果不仅要依靠技术步骤上规范化操作，而且有赖于正确的解释，在报告免疫组化染色结果时不应孤立地解释，应考虑到诊断与鉴别诊断、所应用的抗体特性、所研究组织性质，同时还要注意假阳性与假阴性结果的干扰。

　　1、假阳性 阳性信号定位不正确即为假阳性，包括着色不匀、背景着色、边缘效应，另外组织的某些特定成分也能导致假阳性结果。假阳性可能的原因有：

　　(1)一抗浓度及一抗是否失效，抗体有一个合适的浓度范围且必须在有效期内使用，过期的抗体或者不着色，或者背景着色，形成假阳性；

　　(2)试剂未充分覆盖组织，组织边缘的试剂易干浓度较组织中间高致深染；

　　(3)抗体孵育时间过长，由于室温的影响夏季孵育时间稍短，冬季孵育时间稍长；

　　(4)操作过程中组织变干，造成组织边缘收缩或损坏形成伪影，产生假阳性；

　　(5)3，3'-二氨基联苯胺(DAB)显色时间太长，DAB宜现配现用，配制时间最好在30min以内；

　　(6)由于胞浆里含有较多的蛋白质，因此间质和胞浆中出现很多非特异性的染色，如内源性酶血红蛋白、肌红蛋白等造成的着色，可以通过血清封闭解决；乳腺癌组织中的脂肪细胞、淋巴细胞也会产生非特异性的染色；

　　(7)非特异性抗体吸附常见于坏死组织中，使坏死组织呈较高的背景染色，在免疫组化中应避免选择坏死组织较多的蜡块。

　　2、假阴性 免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性，无阳性信号，假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有：

　　(1)抗原修复方法选择不当，根据不同的抗原特点采用不同的修复方法，大多数抗体要求热修复，热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复；而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化，如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin则不用修复；

　　(2)一抗本身的问题：一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊，进而影响临床诊断及延误治疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照，比较两者染色结果。若阳性对照有表达，表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题；若阳性对照无表达，则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题，应逐一查找原因。