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近期，免疫细胞治疗专家Steve Rosenberg研究组针对KRAS突变点G12D的免疫疗法取得突破性的研究成果，这预示着以往无药可治的KRAS突变现在有救了。该研究结果发表在权威杂志《新英格兰医学杂志》上。 KRAS基因突变是肺腺癌、结直肠癌中一种常见的突变。KRAS基因处于EGFR基因的下游，它的突变会导致对上游EGFR靶点的耐药。同时，目前的研究认为KRAS基因突变是非小细胞肺癌患者不良预后的主要因素，因此KRAS基因也可能是一种常见的导致癌症复发的致癌基因。但是非常遗憾的是，目前还没有任何药物可以直接抑制KRAS蛋白突变。 Steve Rosenberg研究组将一位已经发生肺转移的大肠癌患者的肿瘤组织里分离出了对突变的KRAS特异性作用的CD8+T细胞。这些T细胞在体外扩大培养后回输到病人体内,将病人体内肿瘤一举歼灭。这项针对KRAS突变点G12D的免疫疗法这是第一个靶向Ras突变体治疗肿瘤成功的案例，将不可能变为了可能，预示着以往无药可治的KRAS突变现在有救了。 我们都知道以PD-1抗体和CAR-T技术为代表的肿瘤免疫治疗已经创造了很多奇迹。而该项免疫疗法研究成果中只有一个病例，却能在医学顶级杂志上发表，足见其重大价值。Steve Rosenberg研究组这项TIL细胞疗法的最大意义在于证明了TIL细胞疗法对KRAS突变的患者有效果，这可能会让非常多的KRAS突变患者获益。 这项针对KRAS突变的免疫疗法属于TIL细胞疗法的范畴。TIL细胞疗法是免疫疗法的一种，这些年正在逐步发展，它最初的提出者就是Rosenberg。TIL(Tumorinfiltrating lymphocytes)指肿瘤浸润的淋巴细胞。在手术切除的肿瘤组织中，大部分是肿瘤细胞，也有少部分淋巴细胞。这些淋巴细胞中有部分是针对肿瘤特异性突变抗原的T细胞，是能够杀伤肿瘤细胞的，但是由于一些原因(比如肿瘤微环境和PD-1)，他们的功能受到了抑制，不能在肿瘤组织中有效的杀伤肿瘤细胞。但是，科学家通过一些体外培养方法把这些肿瘤组织中的某类型的淋巴细胞富集起来，再回输给患者，就能够发挥抗肿瘤作用，而且联合PD-1效果会更好。 以下是该项研究的主要内容 从转移性结直肠癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中分离出以KRAS 突变体G12D为靶点且为HLA-C*08:02限制性的多克隆CD8 +T细胞，它们由四种不同的T细胞亚型组成。体外培养到1.11×1011数量级后回输病人体内，7个肺部的转移灶在几周后都变小乃至消失，9个月之后发现其中一个肿瘤转移灶又复发了。该部位肿瘤经手术切除，遗传学分析发现这个肿瘤组织中编码HLA-C*08:02的基因已经缺失了。因此判断，这种CD8 +T细胞介导的免疫疗法只对表达KRAS G12D突变和HLA-C*08:02的肿瘤有效。 细胞治疗主要过程 实验方法： 1.分离出的T细胞的功能鉴定与扩增。测试从患者获得的肿瘤浸润淋巴细胞是否能够识别转移性肺肿瘤表达的体细胞新表位。将这些细胞在细胞回输前2周进行快速扩增程序。 2.体内跟踪T细胞克隆。分别从治疗前的三个肺结节上、进展性病变部位和T细胞输入前后的外周血中，分离出病人治疗用的T细胞，测定基因组上的T细胞受体β链的可变区序列，从而测定对G12D突变体有反应的T细胞受体的频率。 3.评估T细胞受体的反应性。 4.染色体拷贝数分析。以正常样品作为参考，使用Sequenza软件以确定肿瘤染色体拷贝数中的畸变。按文中附录中方法确定肿瘤HLA-C等位基因的频率。 实验结果： 1.临床评价。在细胞治疗后40天里，所有的七个肺转移灶的CT扫描都在恢复正常。其中6个肿瘤部位在治疗后的9个月完全康复或者不断恢复健康。患者在从白细胞介素-2的作用恢复之后没有不良反应，在接受细胞治疗后的2周就出院了。约9个月的时候，对唯一一个复发的病灶和另一个已经恢复健康的病变部位进行了左下肺的VATS切除，其中恢复健康的组织切片的病理分析结果（用苏木精和曙红染色进行）显示没有活的肿瘤细胞。 2. 体内与KRAS G12D反应的CD8 + T细胞频率。输注液中含有至少四种对G12D突变体有反应性的T细胞克隆型。对KRASG12D具有反应性频率最高的T细胞分别占据细胞回输输液袋的49.5％，19.1％和6.9％。这些类型的T细胞在细胞治疗前1周患者的外周血都没有检测到（频率，<>％）。在细胞治疗后40天，在血液中未检测到输液中含量最多的一种T细胞，而在该时间点已经检测到其余几种KRASG12D反应性T细胞。在细胞治疗后约9个月时，在外周血中治疗所用的T细胞分别占所有外周血T细胞的10.4％，4.5％和0.005％，其中数量最多的的T细胞亚型是TRBV10-02突变体KRASG12D反应性T细胞。而相对于外周血，在进展性肿瘤中似乎没有对KRAS G12D反应性T细胞克隆的富集。 3. KRAS G12D-反应性T细胞受体的特异性和灵敏度。 4. 肿瘤的遗传分析。全外显子组和转录组测序显示，唯一一个复发的进展性病变的肿瘤细胞仍然表达KRASG12D突变。然而，染色体拷贝数分析显示该进展性病变存在几种与其它6个病灶不同的遗传异常，其中包括6号染色体上拷贝数中性丢失。编码HLA-C* 08：02等位基因的6号染色体的拷贝丢失，导致HLA限制性原件的缺失，而HLA限制性是T细胞识别KRASG12D突变所必须的，这可能是7个转移灶中唯一一个复发的肿瘤病变区发生免疫逃逸的机制。
这种治疗面临的主要挑战是患者肿瘤的特异性。尽管KRAS G12D突变在胃肠癌中很普遍，但限制性的HLA等位基因仅存在于大约10％的群体中。即使如此，Tran和同事的计算表明，在美国每年有上千名患者可能会符合此疗法的要求。科学家们需要研究其他的HLA等位基因是否能有相同作用，以扩大符合这种治疗条件的患者的人群。或者可以利用合成生物学的工具设计在多种HLA等位基因作用下均能与突变型Ras肽结合的人工受体。这种方法未来很有可能可以治疗多种癌症。 免疫细胞治疗专家Steve Rosenberg 转自细胞培养俱乐部 延伸阅读： 美国最新型的免疫治疗技术成功治疗晚期癌症患者当她走进国家癌症研究所外科主任办公室的时候，有四十年临床经验的Dr. Steven Rosenberg 博士就知道，她的生存期只有几个月了。
Melinda Bachini，在09年确诊为晚期胆管癌肝转移的患者，术后出现双肺多发转移，她曾尝试过毒副作用很大的化疗方案，头发掉光了，头和脚部的神经严重受损，但是病情没有得到任何控制，甚至恶化了。 神奇的是，现在她住在蒙大拿州的比修斯，重新长出了长发，和她的三个最小的孩子们快乐的追逐，她已经被临床治愈了。这一切获益于她参加了美国Dr. Steven Rosenberg团队研发的最新的免疫疗法的临床试验，这个团队是世界最顶尖的免疫疗法小组之一，使用高度个性化的方案攻击治愈Melinda Bachini的肿瘤，这个重大的突破被报道在science杂志上。 说起免疫疗法，很多人可能都已经知道PD-1和CAR-T，但这只是冰山一角，TIL （肿瘤浸润淋巴细胞），是一种新型细胞免疫疗法。它从80年代就已经用在患者身上，主要治疗黑色素瘤，到目前为止，有效率达到56%，包括22%的晚期病人被“临床治愈”。随着科学和临床进步，尤其是基因测序，免疫特异性检测技术开始在其它癌症类型中展现疗效。 因此Dr. Steven Rosenberg使用最先进的基因测序和肿瘤免疫相结合的手段对患者进行治疗。科学家将Melinda的肿瘤组织进行基因测序，找到由E到G这样的突变序列，同时还会培养肿瘤组织中的免疫细胞，然后寻找这些培养的TIL细胞中能识别E到G的这一小群超级免疫细胞，将这些细胞分离出来，在体外扩大培养这些超级免疫细胞，回输给Melinda。回输两周之后，困扰了Melinda很久的慢性咳嗽开始缓解了。第二次回输后，效果真的惊人！她全身肿瘤开始迅速缩小，体力恢复很快。治疗后仅仅一个月，她已经和家人去高山滑雪了！ 下面的对照图可以非常明显看到，第二次治疗前肺部布满的肿瘤，包括一些个头非常大的，第二次TIL治疗20个月后复查，这些肿瘤都非常显著的缩小了。
目前该临床试验正在招募患者（ClinicalTrials.gov Identifier:NCT01174121）：由美国国立卫生临床中心 (CC) 2016 2016年 8 月已验证 主办单位︰国家癌症研究所 (NCI) 由（责任方）提供的信息︰美国国立卫生临床中心(CC)（国家癌症研究所 (NCI)） 实验名称：用肿瘤浸润性淋巴细胞治疗肿瘤转移灶患者 背景︰NCI外科分会研发了从患者的肿瘤中提取白细胞的实验性治疗，在实验室中培养扩增，回输给患者，这些细胞被称为肿瘤浸润性淋巴细胞或 TIL，我们有这种类型的治疗黑色素瘤患者超过 200 例。研究人员想要知道这种疗法在消化道肿瘤、泌尿系统肿瘤、乳腺癌或卵巢癌患者中是否有效。在此研究中，我们将从肿瘤中选取最有效的特殊亚型的白细胞来攻击肿瘤细胞。 目的︰本研究旨在测试这些特定的免疫细胞是否能够有效地缩小消化道、泌尿系统、乳腺及卵巢肿瘤，以及此疗法的安全性。 资格︰成人年龄 18-70，有转移性胃肠道、泌尿道上皮、乳腺或卵巢肿瘤其中之一的患者。 全球肿瘤医生网作为汇集全球顶尖抗癌技术，及顶尖癌症专家的专业癌症患者服务平台，可以协助患者申请该临床试验，详情致电400-666-7998，或登录全球肿瘤医生网。 TIL疗法步骤简介： 第一步，我们得到病人的肿瘤组织块，其中混杂着体积较大的肿瘤细胞（浅蓝色）以及体积小而圆的T淋巴细胞（红色，绿色，深蓝色）； 第二步，将不同种类的T淋巴细胞在细胞板上克隆化，并加入高浓度的IL-2来选择培养； 第三步，在IL-2的刺激下不同种类的T淋巴细胞都得到了克隆扩增，形成了细胞群； 第四步，用病人的肿瘤细胞和扩增后的T淋巴细胞反应，凡是能够发生杀瘤效应的T淋巴细胞群作为阳性TIL群留下（红色），其余的丢弃（绿色，深蓝色）； 第五步，用负载了肿瘤特异性抗原的树突状细胞（DC）进一步扩增培养肿瘤特异性的TIL；最后，回输给预先做了清髓的肿瘤病人。 全球肿瘤医生网，为患者做的更多！ www.globecancer.com 全球肿瘤医生网是由医生组建的专业抗癌技术服务平台，与国内外医院保持密切的会诊和转诊合作关系，可以帮助患者在全球范围内选择最适合的医院、技术、药物、临床实验进行治疗，可以为患者提供终身的抗癌追踪和治疗服务。国内患者可以通过全球肿瘤医生网接受权威癌症专家的会诊，通过平台直接预约前往美国医院治疗，也可以通过平台接受最新抗癌技术评估和治疗。 更多癌症咨询，请加入患者交流群，科学抗癌，互帮互助。全球肿瘤医生网与您一起抗癌！（个别群人数已达上限，无法入群的患友请联系医学顾问，感谢您的关注！） 添加[肝癌交流群] [乳腺癌交流群] [胰腺癌交流群] [结直肠癌交流群] 请扫描以下二维码让群主审核通过
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