|
一. 何时检测？基于流行病学或感控目的。备注：即使mCIM结果呈阳性，亦无需修改碳青霉烯类药敏试验结果。目前不推荐mCIM试验用于常规检测。 二. 方法：美罗培南灭活试验 三. 试剂和材料 1. TSB （2 ml） 2. 美罗培南纸片（10ug） 3. 1-ul和10-ul接种环 4. 营养肉汤（如MH肉汤、TSB肉汤）或MHA平板（100mm或150mm） 5. 美罗培南敏感质控株-大肠埃希菌（ATCC25922） 四. 步骤 1. 取1ul接种环的过夜培养纯菌落于2ml TSB肉汤中 2. 震荡混匀10-15秒 3. 每管放入一张含10ug美罗培南的无菌纸片，确认纸片浸没于菌悬液中 4. 35℃±2℃大气环境孵育4小时±15分钟 5. 孵育结束时，立即用营养肉汤或生理盐水制备0.5麦氏浊度的大肠埃希ATCC 25922菌悬液（直接菌悬法） 6. 菌悬液制备和平板涂布必须15分钟内完成，干燥3-10分钟 7. 用10ul接种环将美罗培南纸片从TSB肉汤中取出，将纸片贴于试管内壁，轻轻按压以挤去纸片上多余水分，然后将纸片取出贴于已涂布有大肠埃希菌ATCC25922的MHA平板上。100mm的MHA平板最多贴4张纸片，150mm的MHA平板最多贴8张纸片（图1）。 8. 倒置平板，35℃±2℃大气环境孵育18-24小时 9. 量取抑菌圈直径 图1. 10ul接种环取出美罗培南纸片（a）；将纸片贴于试管内壁并挤去多余水分（b）；同一接种环取出纸片（c）并贴于MHA平板上（d） 五. 结果解释：见图2a和2b 1. 碳青霉烯酶阳性：美罗培南抑菌圈直径为6-15mm 或直径为16-18mm但抑菌圈内有散在菌落。若待测株产生碳青霉烯酶，纸片中的美罗培南被该酶降解，结果为无抑菌圈或抑制大肠埃希菌ATCC 25922的活性降低。 2. 碳青霉烯酶阴性：抑菌圈直径≥19mm。若待测菌株不产碳青霉烯酶，纸片中的美罗培南不被水解，仍能抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长。 3. 中性：抑菌圈直径为16-18mm，无法判断是否存在碳青霉烯酶（见备注）
六. 备注： 1. 中性结果 a) 检查待测菌株和大肠埃希菌ATCC 25922的纯度 b) 检查美罗培南的质控结果 c) 重复mCIM试验 d) 如果结果仍为中性，建议检测碳青霉烯酶基因 2. 某些菌株可能出现美罗培南抑菌圈内出现散在菌落，若抑菌圈直径≤18mm，结果判定为阳性；若抑菌圈直径≥19mm，结果判定为中性结果。 3. CLSI目前只推荐该标准方法用于肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶的检测 七. 报告： 1. 阳性：报告“检测到碳青霉烯酶” 2. 阴性：报告“未检测到碳青霉烯酶” 3. 中性：报告“无法判断是否产碳青霉烯酶，联系实验室进行讨论” 八. 附加试验和报告 1. 报告mCIM结果用于感染控制或要求提供流行病学相关信息 2. 即使mCIM结果呈阳性，亦无需修改碳青霉烯类药物敏感性试验结果 九. 质控： 1. 每天测试阳性和阴性质控对照株 2. 碳青霉烯酶阳性株：肺炎克雷伯菌ATCC BAA1705 3. 碳青霉烯酶阴性株：肺炎克雷伯菌ATCC BAA1706 4. 美罗培南纸片的质控按CLSI要求执行 5. 5. 资料来源：CLSI M100S-27th |
|
|
