使用Spark 10M实时分析干细胞在分化过程中的细胞增殖1

使用Spark 10M实时分析干细胞在分化过程中的细胞增殖1

生命科学及临床诊断

    源自血管周祖细胞的间充质干细胞（MSC）属于多能成体干细胞，具有高度的自我更新能力。在体外培养条件下，它可以被定向诱导分化成脂肪细胞、软骨细胞、神经细胞、成骨细胞。

    通常，向终末分化的细胞会失去自我更新的能力，这个过程会阻碍细胞增殖。认识细胞在分化和增殖间转换的分子机制，对人干细胞研究有举足轻重的意义。

    在Spark 10M酶标仪上，结合PromoCell公司开发的细胞学试剂，可实时分析人干细胞的分化。整个实验方便快速，可定量、重复且高灵敏地检测细胞活性，增殖以及凋亡。最终结果表明，在体外启动间充质干细胞分化后，细胞分裂并没有立即停止，反而在某些特定条件下，细胞增殖被短暂地诱导升高了。

    Spark 10M拥有非常适合细胞学研究的特点和功能，如细胞明场成像、气体控制、温度及独特的湿度控制等，满足几乎所有生命科学研究应用。

    本实验在96孔微孔板中进行，间充质干细胞过夜贴壁后，我们将细胞培养液分组更换成以下四种定向诱导分化培养液：

Adipogenic（PromoCell C-28016）

osteogenic (PromoCell C-28013)

chondrogenic (PromoCell C-28012)

neurogenic (PromoCell C-28015)

    细胞板置于Spark 10M湿度控制盒中（ 37°C ，5% CO2），在接下来的60个小时中监测MSC的分化情况。我们分别使用PromoCell的WST-8、EdU试剂和Caspase-3三种试剂，检测细胞活性、增殖和凋亡情况。

    干细胞的自我更新与分化间的平衡是受到精确调控的，且其终末分化被认为是会中止细胞增殖的。然而，在体外培养时，干细胞对分化刺激的反应有多快，我们知之甚少。本实验的目标就是监测MSC在体外分化早期的增殖特性。

一．WST-8试剂对细胞没有毒性，活细胞可以将其转化成黄色的水溶性甲臜，适合长时间实时监测细胞活性。下图表明，在分化的初始阶段，活性的上升是由于活细胞数量或细胞活力的增加。

图1. 实时测量WST-8转化获得干细胞分化过程中的活细胞数