植物根系总蛋白提不出怎么办？！

论坛有同学问“要提取植物根系的总蛋白，可是怎么提取总是达不到标准”怎么办，然后是一个大写加粗的问号！

哈哈，请说具体一点可以嘛？用的是什么提取方法，什么步骤？提取总是达不到标准，是浓度还是含量，有没有定量的数据，还有蛋白电泳胶图附上，还有植物是中草药吗？

这里我们提供3种方法参考，不一定有用

TCA/丙酮沉淀法：

称取根系2g，液氮研磨20min，将研磨好的粉末倒入50mL离心管中， 加入50mL冰丙酮（含2%DTT和10%TCA），-20℃过夜，离心（40000xg，4℃）1h弃上清，沉淀加入50mL的冰丙酮（ 含2%的DTT）放入-20℃冰箱中1h（中间取出震荡3次）后离心，重复3次，用氮气将沉淀物吹干，沉淀即为粗蛋白样品。 

Tris/酚提取－甲醇/醋酸铵沉淀法：

称取根系2g，研磨成粉状后，向研钵中加入4mL Tris提取液（50mmol/L Tris，50mmol/L EDTA，100mmol/L KCl，2%DTT，30%蔗糖，100mmol/L PMSF） ，融化后，继续研磨数分钟，转至离心管，加入等体积pH8.0 Tris-饱和酚，涡漩，离心（10000xg，4℃）10min。取酚层， 以等体积提取液加入酚层中抽提2次，往酚层中加入5倍体积0.1mol/L乙酸铵甲醇溶液，-20℃沉淀2h以上。离心（15000xg，4℃）20min，弃上清液，沉淀用-20℃预冷甲醇洗 涤1次，再以丙酮（含2%DTT，-20℃预冷）洗涤2次，室温干燥，所得干粉置-80℃保存待用。

SDS/酚提取法：

2g根系组织液氮研磨成粉，加入10mL冰丙酮（含2%DTT和10%TCA）过夜，40000xg离心1h，弃上清。80%的冰甲醇（0.1mol/L的乙酸铵）-20℃沉淀2h以上，4℃， 40000xg离心1h，弃上清，用80%的冰甲醇洗沉淀2次，加入80%的冰丙酮（2%DTT）洗沉淀2次，4℃，40000xg离心1h，弃上清得沉淀。沉淀加入4mL SDS提取液（2%SDS，0.1mol/L Tris-HCl，pH8.0，2％TT，30%蔗糖，1mmol/L PMSF），混匀，放置10min，加入等体积pH8.0 Tris-饱和酚，涡漩，离心（20000xg，4℃）10min。取酚层，以等体积SDS提取液加入酚层中抽提2次，往酚层中加入5倍体积0.1mol/L乙酸铵甲醇溶液，-20℃沉淀2h以上。离心（15000xg，4℃）20min，弃上清液，沉淀用-20℃预冷甲醇洗涤1次，再以80%丙酮（含2%DTT，-20℃预冷） 洗涤2次，室温干燥，所得干粉置-80℃保存待用。