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一桌好菜需要新鲜的食材，好的科研成果与符合要求的科研样本更如一对情人一样不可分离。今天，小编为大家总结了一篇科研样本的准备和保存手册，希望能在样本的收集、保存和准备过程中给各位科研大咖一些参考和帮助。
用于分子生物学研究的样本主要为RNA和DNA，其中RNA需要比DNA更严格的贮存条件，主要原因是RNA非常不稳定，而且催化RNA降解的RNase酶非常稳定又无处不在，时刻保证RNA在转录成功后迅速分解。因此，我们先来看看针对RNA样本的科研项目应该如何处理和保存样品。
有质检结果的RNA样本为最佳样品，需要参考合同中的送样要求，-80℃低温保存，干冰+安全泡沫盒运输。
快速从活体获取新鲜组织后，剔除脂肪、结缔组织等非研究需要的干扰组织。 快速用（RNase-free）预冷PBS溶液清洗组织块表面的污物和表面液体。 快速用预冷的干净器械，将样品分割成50～100mg左右的小块（即黄豆大小），放入RNase-free的冻存管中。有条件的，最好先液氮速冻3-4小时。 -80℃低温保存（长期保存建议至于液氮罐）。 需要干冰+安全泡沫盒运输。
Note： 组织样品离开活体后，建议在低温环境下于半小时内完成以上1-4步骤，操作时间越长，RNA降解越严重。 如果使用商业RNA保护试剂保存组织样品（如RNAlater），请严格按照说明进行操作。 如果使用Trizol裂解液保存送样，请先进行组织液氮研磨，然后将组织粉末加入Trizol中彻底裂解(使细胞充分裂解，这样才能使RNA完全处于Trizol的保护下，这样保存时间也才会更长)。一般建议50-100mg组织加入1mL Trizol裂解。常温裂解15min后（此步不可省略），-80℃低温保存，干冰+安全泡沫盒运输。
Note：大部分植物组织样品也可采用Trizol保存法。 贴壁细胞 显微观察贴壁细胞，确认细胞状态良好。 去除细胞培养液，3-5ml PBS(RNase free)漂洗1~2次，彻底去除PBS溶液。 用足量的细胞裂解液/TRIzol对细胞进行裂解，轻轻反复吹吸，直至裂解液澄清，没有细胞团块（一般实验的建议细胞量为3-10*106，约需要1mL Trizol）。 将细胞裂解液移到1.5mL的RNasefree离心管中，室温静置裂解5min后，转移至-80℃冰箱长期保存，干冰+安全泡沫盒运输。
悬浮细胞 显微观察，确认细胞状态良好。 低速离心收集细胞（5000rpm以下，不超过5min）， PBS（RNase free）漂洗1~2次，彻底去除PBS溶液。（此处，离心收集细胞后可以液氮速冻直接长期保存）。 充足量细胞裂解液/Trizol对细胞进行裂解，轻轻反复吹吸，直至裂解液澄清，没有细胞团块（一般实验的建议细胞量为3-10*106，约需要1mL Trizol）。 离心管短期保存于-20℃冰箱中（1周内），如长期保存可转移至-80℃冰箱，干冰+安全泡沫盒运输。
全血 全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。⼀般后续⽤于分⼦实验的全⾎样本为EDTA抗凝全⾎，且为2⼩时内的新鲜⾎液。提取RNA的样品不推荐全血冻存（冷冻后的溶解，会导致RNA酶的释放，引起RNA严重降解），一般建议以下三种保存送样方法。 ⽴即溶于 TRIzol LS裂解，参考⽤量为每 250 µL 全⾎加 750µL TRIzol LS，待充分裂解后，可以 4°C (<1>天) 或-20°C (<1>个⽉ ) 短期保存， -80°C 低温长期保存 (>1 个⽉ )。⽤⼲冰+安全泡沫盒运输。 尽快用淋巴分离液分离抗凝血，充分去除红细胞，保留有核细胞（RNA主要来源于有核细胞），然后加入Trizol LS裂解放入-80度保存。干冰+安全泡沫盒运输。 使用商业BD PAXgene blood tube（全血RNA）管保存。PAXgene®血液RNA管内含稳定体内基因转录性状的添加剂，可以快速的保护细胞内的RNA不被降解。该管可常温保存3天，4度保存5天，-20℃或-80℃保存50个月以上。依据时间选择常温或冰袋或干冰+安全泡沫盒运输。
血浆样本 ⾎浆是全⾎收集后加⼊抗凝剂抗凝，离⼼后的上清液。为获得⾎浆进⾏实验，应使⽤抗凝管采集全⾎，两⼩时内分离⾎清。采⾎后轻轻倒转采⾎管混合，抗凝后1000～2000g、 4℃冷冻离⼼10分钟 (2000g离⼼15min可以去除⾎⼩板)，分离⾎浆和细胞组分，上清转移到新的离⼼管中，4°C 1 4000g离⼼10分钟，分离得到的上清即为⾎浆。 血清样本 ⾎清是全⾎收集后待其凝结，离⼼去除结块后的液体部分。为获得⾎清，应使⽤凝⾎管收集全⾎，采⾎后两⼩时内分离⾎清。采⾎后轻轻倒转采⾎管混合4~5次，直⽴置于室温待⾎液完全凝固 (⼀般约15～ 30min，可使⽤促凝管加快凝⾎时间⾄5～ 10min)， 1000～ 2000g、 4°C冷冻离⼼10分钟，上清转移到新的离⼼管中， 4°C 1 4000g离⼼10分钟，分离得到的上清即为⾎清。
⾎清分装到 2mL 冻存管， 每管 400µL~500µL， -80°C 低温保存; ⽤⼲冰+安全泡沫盒运输。 或者⽴即溶于 TRIzol LS 裂解，参考⽤量为每250 µL ⾎清加 750µL TRIzol LS， 待充分裂解后，可以4°C (<1 天)="" 或-20°c=""><1 个⽉="" )="" 短期保存，="" -80°c低温长期保存="" (="">1 个⽉ )。⽤⼲冰+安全泡沫盒运输。
DNA样本相对容易保存，需要注意以下事项。 新鲜采集血液后，抗凝血管收集(可选用EDTA或枸橼酸钠抗凝，避免使用肝素抗凝)。 血液样品可直接存放于采血管中，或分装到1.5mL的离心管里。 一般可在4℃保存一周，或-20℃保存一个月，若要长时间保存，应保存于-80℃冰箱。用于DNA提取，建议外周血总量2ml以上，血浆6ml以上。 需要冰袋+安全泡沫盒运输。
优先选用新鲜采集的样品送样，其次才是冻存的样品。采集样品时应选取核酸含量较多的部位(如：植物的幼嫩部位，血液白细胞，动物的肝脏等组织)。 植物样品采集时建议用无菌水或75%乙醇擦拭或冲洗干净，再用吸水纸吸干样品表面；动物样品采集时建议活体取材后用生理盐水进行漂洗，以去除血渍和污物，并剔除结缔组织和毛发等非研究组织，样品分割和处理时应尽量在冰上进行，防止样品降解。 样品采集时建议将样品按照一次提取的量进行分管保存。避免提取时由于二次分管和并管引起样品降解。 所有动植物组织样品均建议离体后建议立即液氮冻存，然后-80°C保存。动物组织可以采用75%酒精保存。 需要干冰+保温箱运输。
细菌样品建议收集液体培养基中对数生长期的菌体，冷冻后干冰送样。不建议送样生长在固体培养基上的单菌落。-80℃冰箱冻存或长期放置于液氮中，需要干冰+保温箱运输。 水体微生物样品建议将用滤膜过滤水体，将微生物富集在滤膜上，然后将滤膜冻干后进行送样。需要干冰+保温箱运输。 土壤微生物样品强烈建议使用15ml或50ml离心管进行装载，使用自封袋容易撒漏导致样品交叉污染。需要干冰+保温箱运输。 粪便收集后立即-80℃保存，强烈建议使用15ml 或50ml 离心管进行装载，使用自封袋容易撒漏导致样品交叉污染。需要干冰+保温箱运输。
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