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  云南省曲靖市第二人民医院检验科

    乙二胺四乙酸（EDTA）盐具有对红细胞、白细胞形态影响很小且能阻止血

液凝固的优点，因此国际血液学标准化委员会（ICSH）于1993年推荐将EDTA—K₂作为血细胞计数的抗凝剂，目前在世界各地广泛应用^[1]。

   但在实际工作者我们发现，EDTA—K₂抗凝剂可引起极少数人的血小板发生聚集，导致血细胞分析仪血小板计数假性减少和白细胞假性升高的现象，即为
EDTA依赖性假性血小板减少症（EDTA—PTCP），国外临床发生率为0.07—
1.0%，而国内报道为0.77%，国外有报道EDTA—PTCP用枸橼酸钠抗凝后，有72%的病例还是有聚集，但在国内报道甚少^[2]。我们自2014年1月-2015年9月共发现
因EDTA—K₂造成血小板假性减少7例，其中5例因更换抗凝剂为1：9枸橼酸钠血小
板计数正常，稀释法血小板计数、涂片瑞氏染色显微镜检查显示血小板正常；
2例EDTA—K₂、枸橼酸钠2种抗凝剂均导致血细胞分析仪依赖性假性血小板减少，

现报告如下：

病例1.女，32岁，因“反复性下腹疼痛1年半”于2015年2月1日入住我院妇科。

入院初诊：

1.慢性盆腔炎

2.右侧输卵管粘连并积水

3.鞍形子宫

查体

T：36.5℃、P：68次/分、R：18次/分、BP：102/69mmHg，皮肤、巩膜无黄染、

无瘀点、瘀斑

实验室检查

肝肾功能、电解质正常.

传染病标志物检测：阴性；PT：10.3秒、INR：0.90、APTT：36.3秒、TT：19.7

秒、FIB：2.01g/L

   患者2015年2月2日SYSMEX—4000i血细胞分析仪术前血常规结果：

WBC:8.02×10⁹/L、RBC:4.35×10¹²/L、HB：133g/L、HCT：37.1%、PLT：4×10⁹/L、MCV：85.3fl、MCH：30.6%、MCHC：358fl、RDW—SD：33.1fL、RDW—CV：11.0.

   该患者于2015年2月4日行“腹腔镜盆腔粘连分离术+宫腔镜检查+美兰通液

术”，手术顺利，术中出血约10ML，属Ⅱ类切口，术后给予促宫缩、抗炎、对症

治疗，病情恢复平稳，于2015年2月10出院。遵医嘱，3、6月后回访无特殊不适。

病例2

  男性，86岁，因“咳嗽、咳痰、喘息、发热1天”，于2015年7月25日入住我

院呼吸内科。

查体

  T：38.5℃、P：90次/分、R：22次/分、BP：112/66mmHg，一般情况欠佳，

神清、唇舌发绀、咽部充血、肺气肿征象、双肺呼吸音低、双肺可闻及湿性啰

音、散在哮鸣音，HR：90次/分，心律齐、未闻及杂音、腹软、剑下压痛、无反

跳痛、双下肢轻度水肿，皮肤、巩膜无黄染、无瘀点、瘀斑。

实验室检查

TP：76.5g/L、ALB：26.9g/L、GLB：49.6g/L、A/G：0.54、AST：103U/L、ALT：25U/L、GGT：46U/L、CHEA：2025U/L、LDH：249U/L、HBDH：263U/L、GLU：7.08mmoL/L

传染病标志物检测：阴性

凝血功能检测PT：14.7秒、INR：1.08、APTT：41.9秒、TT：20.3秒、FIB：2.12g/L

患者2015年7月27日SYSMEX—4000i血细胞分析仪血常规结果

WBC:4.59×10⁹/L、RBC:3.66×10¹²/L、HB：109g/L、HCT：35.8%、PLT：11×10⁹/L、MCV：97.8fl、MCH：29.8%、MCHC：304fl、RDW—SD：60.8fL、RDW—CV：18.1。

  

    以上2例患者肉眼仔细观察血标本无凝块，仪器报警血小板聚集（Platelet,PLT），血小板直方图出现翘尾、无拟合曲线，用抗凝血涂片瑞氏染色显微镜检查：可见血小板聚集，聚集的血小板数量不等、多少不一，呈小簇、成堆或片状分布，因而怀疑是EDTA—K₂依赖性假性血小板减少症（EDTA—PTCP）,当日即告知临床让患者到我科采用EDTA—K₂、1:9枸橼酸钠2种抗凝剂、手工稀释法采集血标本，于1分钟、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、1小时、2小时分别用SYSMEX—4000i血细胞分析仪检测血小板及手工血小板计数（见图1、2），同时用抗凝血涂片瑞氏染色显微镜检查（见图3、4）。

图1（病例1）  EDTA—K₂、枸橼酸钠、稀释法血小板计数图：

图2（病例2） EDTA—K₂、枸橼酸钠、手工稀释法血小板计数图：

图3   EDTA—K₂抗凝血瑞氏涂片染色（10×100）

EDTA—K₂抗凝血1分钟

EDTA—K₂抗凝血10分钟

EDTA—K₂抗凝血20分钟           

EDTA—K₂抗凝血30分钟

EDTA—K₂抗凝血40分钟                 

EDTA—K₂抗凝血1小时

EDTA—K₂抗凝血2小时

图4  1：9枸橼酸钠抗凝血瑞氏涂片染色（10×100）

枸橼酸钠抗凝血1分钟 

枸橼酸钠抗凝血10分钟

枸橼酸钠抗凝血20分钟                 

枸橼酸钠抗凝血30分钟 

枸橼酸钠抗凝血40分钟            

枸橼酸钠抗凝血1小时

枸橼酸钠抗凝血2小时

 

结果：

   从以上实验结果可以看出，用EDTA—K₂抗凝的血细胞分析仪血小板计数＜枸橼酸钠抗凝的血小板计数＜手工稀释法的血小板计数，2种抗凝剂抗凝的血小

板计数均随着时间的延长，血小板数呈明显下降的趋势，与手工稀释法的血小板

数有显著性差异（P＜0.05），而未抗凝血小板稀释手工计数法仍作为血小板计

数的参考方法^[3]。

   2例患者结果均显示使用EDTA—K₂抗凝剂抗凝，在血液标本采集后1分钟血小板即开始聚集，10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、血细胞分析仪血小板计数值呈明显下降趋势，同时瑞氏染色显微镜检查显示血小板呈不同程度聚集，1小时、2小时血小板计数值最低，达到聚集高峰, 瑞氏涂片染色显示成堆、片状聚集（图3），使用EDTA—K₂抗凝剂抗凝的血标本各时间段血细胞分析仪血小板计数明显低于手工稀释法的血小板计数，差异有统计学意义（P＜0.05）；1:9枸橼酸钠抗凝剂抗凝1分钟血小板数与手工稀释法血小板计数差异无统计学意义（P＞0.05）），10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、1小时血小板计数值呈明显下降趋势，瑞氏染色显微镜检查显示血小板呈不同程度聚集，2小时血小板计数值最低，达到聚集高峰，涂片瑞氏染色可见成堆、片状聚集（图4），EDTA—K₂抗凝剂抗凝的血标本较枸橼酸钠抗凝的血标本聚集明显。

   2例均显示EDTA—K₂抗凝标本在采集后1分钟血小板即开始发生聚集现象，枸橼酸钠抗凝标本10分钟血小板开始发生聚集现象；EDTA—K₂抗凝标本较枸橼酸钠抗凝标本血小板聚集更加明显，这与邝妙欢等的报道一致^[4]。

讨论

    EDTA—PTCP产生的原因与血小板表面存在的某种隐匿性抗原有关^[5]，EDTA可诱导血小板活化，产生血小板糖膜（GP）改变^[6]，即血小板形态发生变化，由正常的圆盘状变为圆球形，导致血小板膜表面某种隐匿性抗原构象的改变，这些活化的血小板与血浆中存在的自身抗体抗血小板抗体和（或）抗心磷脂抗体结合^[7]，激活细胞膜中的某些活性物质，这些活性物质能活化血小板纤维蛋白原受体（FIB—B）, 促使血小板与纤维蛋白原聚集成团，血细胞分析仪错将聚集的血小板误认为白细胞或巨大血小板从而导致血小板计数假性降低，临床医生易发生误诊误治，我们在实际工作中也碰到过类似的病例，血液科医生为了明确诊断，往往会进行骨髓穿刺涂片检查，个别病例甚至已经开始药物治疗，这样既加大了患者的精神负担，同时也增加了医疗费用的支出。

   通过本实验可以看出，EDTA—K₂、1:9枸橼酸钠均可导致假性血小板减少，而且，随着时间的延长血小板计数值也随之下降，因此，时间也可能是加速EDTA依赖性血小板减少的一个因素。2例结果表明，EDTA—K₂抗凝剂抗凝，在血液标本采集后1分钟血小板即开始聚集，1:9枸橼酸钠抗凝剂抗凝，血液标本采集10分钟内不会使血小板发生聚集。
 
   枸橼酸钠是一种钙的螯合剂，呈碱性，可与钙离子形成可溶性螯合物，其抗凝性弱，易使血小板聚集而致血小板数减少，并且枸橼酸盐抗凝能力不强，不仅对血小板计数有影响，对白细胞计数、分类均有不同程度影响^[8]。大部分EDTA—K₂引起的假性血小板减少可以被枸橼酸钠纠正，也有部分不被纠正^[9]。

   由前所述，我们发现因EDTA—K₂造成血小板假性减少7例，其中5例因更换抗凝剂为1：9枸橼酸钠而被纠正，2例EDTA—K₂、枸橼酸钠2种抗凝剂均导致血小板假性降低，而稀释法、涂片瑞氏染色均显示血小板数正常。

   血小板是由骨髓中成熟巨核细胞的胞质脱落而成，血小板的生理功能包括粘附、聚集、释放等，主要功能是凝血、止血作用和修补破损的血管，这些功能是在血小板激活后几乎同时出现的。当血小板数降低时，很容易发生出血不止的现象，给病人的生命带来威胁。总之,在日常工作中进行血常规检测时，如遇血小板显著减少、直方图异常、仪器报警血小板聚集等，且患者无瘀点、瘀斑等出血情况，应高度怀疑EDTA依赖性假性血小板减少。对于此类患者，首先要进行血涂片镜检，观察血小板的数量、形态，尤其要注意片尾、边缘是否有血小板聚集；其次，要告知临床医生，此类患者要获得真实、准确的血小板结果只有用手工稀释法，以避免因血小板假性减少引起的误诊、误治、为临床提供准确、可靠的诊断、治疗依据。
 

参考文献

[1]Gohen  AM,Gycowitz  Z,Mittelman  M,et  al .The  incidene of  EDTA—dependet pseudothrombocytopenia in automatic blood analyzers .Haematologia,2000，30(2)：117.

[2]丁邦显，刘思景.抗凝剂EDTA—K₂引起的血小板减少原因分析. [J].检验医学与临床.2011. 8（19）:2357—2358,2360.

[3] 刘学斌，邹雪梅，黄冬梅等，两种抗凝剂对血小板的影响因素临床分析 [J].河北医学.2013.19.（10）:1596.

 [4]邝妙欢.刘晓华.钟义富等，EDTA依赖性假性血小板减少症血小板的检测. [J].国际检验医学杂志，2010,31（11）：1224—1228.

[5]Bragagni G,Bianconcini G,Brogna R,et al.Pseudothrom bocylopenia  clinical  comment on 37  cases [J].M inerva M ed,2001,92(1):l3—17.

[6]Rao  G H,Peller J D,White  J G , Influence of ionized calciunm on theombin  induced down regulation  of GPⅠb/Ⅸ receptors on hum an platelets [j].thromb Res ,1997 85(1)：23-31.

[7]Bizzaro N,Brandalise M,EDTA—dependent  pseudothrom bocytopenia A ssociation with antiplatelet and antiphospholipid an tbodies[J].AM J C lin patho,L 1995 103(1)：103—107.

[8]王伟，王海梅，杨萍等.EDTA—K₂和枸橼酸钠同时依赖的假性血小板减少病例分析.[J].中华全科医学杂志，2013,11（5）:787.

[9]徐秀湖，朱洁琳. EDTA—K₂和枸橼酸钠1：4抗凝剂均引起血小板假性减少1例报道. [J].实验与检验医学.2014，32（3）：363.