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转载请注明：解螺旋·临床医生科研成长平台 在素来等级分明的SCI文章世界中，5个法宝（细胞增殖、凋亡、迁移、浸润和周期）搭配1条常见通路，才堪堪跨过1-2分这个入门级别的坎儿（详情请看《天冷了，抱着1-2分SCI套路暖脚可好》）。 可如今对1-2分文章已经信手拈来的童鞋们，自然不会只满足于此，更是心心念念地想着冲破2-3分的大关，那么又该如何改造文章使其一举跃过3分这个临界线呢？小编千辛万苦寻找了一篇火热的lncRNA的文献研究，以实际内容为例，告诉大家3分文章到手也没有辣么难。 文章题目：《Long noncoding RNA HNF1A-AS1 indicates a poor prognosis of colorectal cancer and promotes carcinogenesis via activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway》，这是一篇2017年刚发表在Biomedicine & Pharmacotherapy 杂志上的文章，IF=2.90，文章的概要是做一个LncRNA 如何成功成为一个结肠癌的预后标记物，并且做了一个常见的Wnt/β-catenin信号转导通路。那赶快跟着小编来看一看，怎样做能发到2-3分。 1 Lnc HNF1A-AS1在人结肠癌组织中高表达 ，并且与肿瘤组织的大小和分期相关 1.作者首先采用RT-qPCR技术分别检测在142 个结肠癌组织和癌旁组织中HNF1A-AS1的表达量。结果显示：与癌旁组织相比，HNF1A-AS1的表达量在癌组织中是显著增高的。 这一步是常规筛选，几乎做肿瘤标记物的文章都会用到RT-qPCR实验来筛查目标基因。 2．作者更深一步检测了在正常结肠上皮细胞和6种结肠癌细胞（CRC）中的表达量，结果显示：与正常细胞相比，lncRNA基因HNF1A-AS1的表达量在6中细胞系中是升高的。 在1-2分的文章中往往只证明一种正常对照和一种癌细胞，而在该篇文章中验证了6种细胞系，足以证明该LncRNA在CRC中普遍增高的表达性。 3.作者继续分析该lncRNA在结肠癌组织中的表达与肿瘤组织的大小和分期的关系，结果表明：结肠癌组织越大的lncRNA表达量越高，而癌TNM分期程度越深，lncRNA的表达量也越高。
以上这些数据都充分证明，HNF1A-AS1在人结肠癌中是致癌基因参与到人结肠癌病理形成。 2 高表达的LncRNA HNF1A-AS1预示着结肠癌差的预后并且具有一定的诊断价值 1．采用生存分析Kaplan–Meier曲线和log-rank检验分析HNF1A-AS1和结肠癌病人的预后之间的关系。 结果表明：HNF1A-AS1表达水平越高总生存率越低，无病生存率越低。
备注：无病存活率 （DFS）就是指无病存活的比率。某人得癌症 接受治疗后 继续生存了5年 ，其中 前3年没有发过病，那么这5年 就称为实际存活， 没有发病的3年 称之为无病存活。 2.而后又检测了HNF1A-AS1是否具有诊断价值，采用了ROC曲线进行敏感性和特异性分析，结果显示：HNF1A-AS1的表达能够从非肿瘤组织和肿瘤组织中区分，具有一定的诊断价值。
综合以上结果表明：HNF1A-AS1很可能参与了结肠癌病人的预后和诊断。 3 在CRC细胞系中沉默HNF1A-AS1后，减少了CRC细胞的增殖 1.在HCT-116 和 SW620细胞中，沉默HNF1A-AS1后，利用qPCR技术检测HNF1A-AS1的表达水平，结果显示与对照组相比HNF1A-AS1的表达水平显著下降。
2.采用MTS技术检测沉默HNF1A-AS1后，HCT-116和SW620细胞的增殖情况，结果发现沉默HNF1A-AS1后，HCT-116和SW620细胞的增殖明显被抑制。
3.克隆形成实验结果表明沉默HNF1A-AS1后，减少了HCT-116和SW620细胞的克隆活性。
4.细胞周期实验结果显示沉默HNF1A-AS1后，余干扰对照相比，两种细胞都停滞在G0/G1期，G0/G1期扩大，而S期和G2期减少。
以上4个实验充分证明了沉默或者是干扰HNF1A-AS1后减少了CRC细胞增殖。而我们在1-2分的文章中，看到了证明增殖的实验只是单一的CCK8或者MTT，这里近3分的文章用了4种方法而且是在2种细胞系中研究。 4 沉默HNF1A-AS1后，抑制了CRC细胞的浸润和迁移 Transwel实验检测沉默HNF1A-AS1后对CRC细胞浸润能力的影响，结果显示：与干扰对照组相比，HCT-116和SW620细胞的浸润和迁移能力均受到阻滞。
5 沉默HNF1A-AS1，抑制Wnt/β-catenin信号通路可抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和浸润 1.作者用PCR水平技术检测β-catenin, c-myc 和 cyclin D1的mRNA表达水平，结果发现与干扰对照组相比β-catenin, c-myc 和 cyclin D1的表达水平下降。
2.作者用WB水平技术检测β-catenin, c-myc 和 cyclin D1的蛋白表达水平，结果发现与干扰对照组相比β-catenin, c-myc 和 cyclin D1的表达水平下降。
以上2-3分的文章已经讲完了，我给大家留一个思考题，作者做了6个结肠癌细胞系，为什么只选HCT-116和SW620两种细胞系继续深一步做实验呢？读完文章相信一定有同学知道升级到3-4分的文章切口在哪里了?那我们下期再见喽！
。。。。。。还没有走远 这里我给大家科普了一个经典的Wnt/β-catenin信号通路图，同学们有看到升级的入口吗？
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