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前段时间，阿尔兹海默症领域上演了一出堪比好莱坞大片的反转剧，一直被业界认为该疾病罪魁祸首的 β 淀粉样蛋白，很可能在大脑的细胞组织中扮演「清道夫」的角色。β 淀粉样蛋白的存在有其特殊的使命，是为阻止病毒、细菌和真菌等微生物对大脑的感染伤害而生[1-2]。 左边是正常人健康的大脑，右侧是晚期阿尔茨海默症患者的大脑，图片来源于 Tocris β 淀粉样蛋白是否能沉冤得雪？何种病原体引发 β 淀粉样蛋白聚集？针对该病原体设计药物，是否能治愈阿尔兹海默症？仍需大量科研佐证，尚未能盖棺定论。 图片来源于 Forbes 阿尔兹海默症神经病理特征包括淀粉样斑块、神经纤维缠结、神经元死亡、大脑萎缩[3]。细胞凋亡是神经退行性疾病中神经元死亡的主要途径，并与众多疾病相关，如何高效研究细胞凋亡，方能事半功倍？答案是 pSIVA。 pSIVA——凋亡检测的新型探针 
在细胞凋亡的早期阶段，磷脂酰丝氨酸（PS）从双层膜的内层（细胞质）向外层质膜内小叶翻转，因而，PS 的外翻被认为是凋亡的标志。pSIVA (Polarity Sensitive Indicator of Viability & Apoptosis) 是一种最新的基于 Annexin XII 的探针，与 PS 高度亲和。如何检测 pSIVA 呢？需要进一步偶联控制荧光发出的极性敏感染料——IANBD。 给细胞凋亡检测安个「开关」 pSIVA 无疑是检测 PS 外翻技术的飞跃，归功于它的「开关」属性： ➤ 极性敏感「开关」：在溶液中，pSIVA-IANBD 不会发出荧光。 然而，当 pSIVA-IANBD 与外翻的 PS 结合，形成的非极性环境被 IANBD「感知」，打开「开关」，即可发出荧光。 ➤ 结合逆转「开关」：在某些细胞凋亡的「拯救行动」中，PS 会翻转回双层膜内侧，pSIVA-IANBD 脱离，关闭「开关」，导致荧光的淬灭。 pSIVA 凋亡检测示意图，图片来源于 Novus pSIVA-IANBD：一种极性敏感、结合可逆的荧光探针，用于检测双层脂膜上 PS 的外翻。Propidium Iodide (PI)：一种鉴定细胞膜丧失完整性的染料，如凋亡晚期、坏死等。 领先于 AnnexinⅤ的绝对优势 另一常用的凋亡检测探针 Annexin V，在游离状态或与 PS 结合状态均会发荧光。由于 pSIVA 的「开关」属性，与 Annexin V 相比，pSIVA 具有显著优势： 一方面，pSIVA 操作简便，直接添加、孵育之后进行分析。Annexin V 操作过程中必须额外增加洗涤的步骤，以去除未结合的探针，减少荧光背景。另一方面，pSIVA 可通过密切监控 PS 的外露来研究细胞「起死回生」的过程，Annexin V 则不能做到。 pSIVA 与 Annexin V 特征对比表格，表格来源于 Novus
pSIVA-IANBD 与 Annexin V-FITC 流式细胞对比试验，左：未处理；中：星孢菌素（1 h）；右：星孢菌素（3 h），图片来源于 Novus Novus pSIVA 凋亡检测试剂盒 Bio-Techne 旗下 Novus 品牌的 pSIVA 凋亡检测试剂盒应用广泛，在流式细胞术、显微镜观察、体内和体外研究中均可使用。
Novus pSIVA 凋亡试剂盒列表 高品质需要实践的验证，下图使用 NBP2-29382 展示了神经元的「死而复生」过程，加入 NGF 30 h 之后，观察到部分区域荧光的减弱，表明凋亡神经元的减少。
图片来源于 Novus 在流式细胞技术检测中，采用 NBP2-29611 试剂盒研究喜树碱对细胞凋亡的影响，分别观察未处理、喜树碱处理 2 小时、喜树碱处理 4 小时的细胞状态，显示细胞凋亡数量的逐步增多。
图片来源于 Novus |
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