FuGENE6转染试剂中文操作说明

FuGENE^® 6原是Roche公司的旗舰转染产品，如今已归为Promega公司旗下。它是一种非脂质体转染试剂，广泛适用于高效转染各种细胞系，且细胞毒性非常低。由于使用该转染试剂转染时不要求去除血清或培养液，并且转染后也不要求换液去除，因而使用起来非常方便。

配方和包装：

FuGENE^® 6是由脂质与其他组分按照合适比例混合，溶于80%乙醇而成。试剂通过0.1μm的滤器过滤并分装至小玻璃瓶。

注意事项：

转染前须保证FuGENE^® 6温度已经达到室温，使用前须上下颠倒数次进行简单混匀。建议使用标准的24孔板作为FuGENE^® 6转染试剂的支架。请不要将原瓶中的FuGENE^® 6进行分装。尽可能减少FuGENE^® 6原液与塑料制品的表面接触。不要使用硅化的枪头或离心管。在稀释FuGENE^® 6时，请务必保证将FuGENE^® 6直接混入培养基，而不要接触到离心管。（研小弟注：还要防挥发，毕竟溶于80%乙醇，所以也不宜分装）

抗生素的使用：

在细胞系的常规培养时可以使用抗生素。但在转染时抗生素的存在可能会影响转染的效率以及转染细胞的整体健康。除非之前已经在转染细胞中测试过，否则我们不推荐在转染培养液中添加抗生素。

转染步骤：

以下是一个简易的中文转染步骤示意图

具体的转染步骤包括：

• 细胞的接种
  

在转染前一天接种细胞，保证在转染时细胞的汇合度在50-80%，悬浮细胞可以在转染当天接种。通常96孔板中每个孔适宜接种100μl含1-2×10⁴的贴壁细胞或2×10⁴到1×10⁵的悬浮细胞。对于其他规格的培养板的推荐细胞数，可参考下表（数据针对Corning公司生产的培养板）。

培养板规格	生长面积 (cm2)	相对面积
96-well	0.32	1×
24-well	1.88	5×
12-well	3.83	10×
6-well	9.4	30×
35mm	8	25×
60mm	21	65×
100mm	55	170×

• FuGENE^® 6转染试剂的准备
  

• 转染前保证FuGENE^® 6温度已经达到室温
• 使用前上下颠倒数次进行简单混匀。
  

• 常规转染步骤
  

我们强烈推荐您针对每个细胞系建立优化转染条件。如果您选择不进行转染参数的优化，请使用下面推荐的常规条件。（研小弟注：这里还有一部分说怎样进行条件优化的问题，主要优化的条件包括DNA的用量以及转染试剂与DNA比值的优化，然后就是不同条件的排列组合，最后基于报告系统进行评估，有兴趣的朋友可以参考原说明书的相关内容）

• 最终加入96孔板每个孔中液体、DNA以及FuGENE^® 6的总体积应在2–10μl，请在一个无菌的聚苯乙烯管或U型或V型底的培养孔板的一个孔中加入90-98μl室温预热的培养液，以保证在步骤2中加入DNA后总体积为100μl。对于FuGENE^® 6:DNA比值为3:1时，请在培养液中加入6μl FuGENE^® 6，立即进行混合，室温孵育5min。
  注意：在加入FuGENE^® 6时，请务必保证将FuGENE^® 6直接混入培养基，而不要将未经稀释FuGENE^® 6直接接触到离心管或培养孔板壁。
  
• 在FuGENE^® 6/培养液混合物中加入2μg质粒DNA（0.2–1μg/μl），立即混匀。室温孵育15min。
  注意：孵育时间超过45min可能会影响转染效果。
  
• 在接种有细胞、含100μl培养基的96孔板的每个孔中加入2–10μl上述混合物。我们推荐加5μl混合物作为一个起点。吹吸或使用振荡器10-30s进行混匀。将细胞放回培养箱继续培养24-48h。
  注意：生长培养基的体积可依据培养板的规格以及您实验室的习惯做法而有差异。
  
• 使用合适的报告基因测试转染效率。对于瞬时转染，通常可在转染后24-48h进行检测。
  

（乐研生物 www.）
参考：

• 说明书下载