桥式PCR
做好了Library之后,就要做桥式PCR了,桥式PCR实际上是把文库种到芯片上去。然后进行扩增这样一个过程。这个过程,首先是把文库加入到芯片上,因为文库两头的DNA序列,和芯片上引物是互补的。所以就会产生互补杂交。这个过程,首先是把文库加入到芯片上,因为文库两头的DNA序列是和芯片上的引物是互补的。所以就会产生互补杂交。 杂交完之后在这里面加入dNTP和聚合酶,延着模板合成出一条全新的DNA链来,新的这条链和原来的序列是完全互补的。接下来再加入NaOH碱溶液,DNA双链在NaOH碱溶液存在下,就解链了。而且被液流一冲那根原来的链也就是没有和芯片共价连接的链就被冲走了,而和芯片共价连接的链就被保留下来。 然后在在液流池里面加入中性液体,主要是为了中和碱液,在加入中性液之后,整个环境变成中性了。这时候DNA链上的另外一端,就会和玻璃班上的第二种引物发生互补杂交。 接下来我们加入酶和dNTP,聚合酶就沿着第二个引物合成出一条新的链来。然后我们再加碱把第二条链解链解开。然后再加中和液,这时候,DNA链会和新的引物杂交。 再加酶,再加dNTP。又从新的引物合成出新的链来,连续重复这一过程,DNA链的数量,就会以指数方式增长。 明天会介绍测序的原理
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