手把手教你用 Quantity One 计算电泳条带的分子量

做分子生物学和生物化学实验的同胞们，每天不跑个几块蛋白胶都不好意思说自己做了实验。

蛋白胶跑完后，有时我们只需要用肉眼对结果进行分析，而有些时候，则需要借助软件。最常用的电泳条带分析软件非 Quantity One 莫属了。

笔者曾请教过实验室的各大师兄师姐，结果无一例外大家都是靠 「肉眼分析」，没办法，笔者只好自己摸索着学习。现在，笔者手把手教你如何用 Quantity One 计算电泳条带的分子量，师兄师姐们也来看一看噢。

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打开 Quantity One 软件，界面如下：

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打开图片：点击 File—Open，或者点击 File 下的打开按钮，随后在窗口空白区域单击鼠标左键，弹出文件窗口，选中需要打开分析的电泳图片（注意：图片必须是 TIF 格式，如果是其他格式的图片，可以用 PS 进行转换；若电泳图片不是黑白，则会自动转为黑白），即可将图片打开。

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创建泳道：选择 Lane—Auto Frame Lanes，这时，如果电泳图片比较标准，软件就会自动识别出每条电泳泳道的位置，并将各个泳道用一条红线标出来；如果对软件自动标记的泳道不满意，可以通过 Lane—Edit Frame 下级各个子菜单提供的诸如 Add Anchors，Move Frame 等功能对泳道进行调节，确保红线通过泳道的中心路径；

然而不是所有电泳图片的泳道都能被自动识别，在不能自动识别的情况下，就需要手工绘制电泳泳道，方法和上面一样。选择 Lane—Single Lane—Creat Lane，将鼠标移至打开的图片中，这时鼠标后面会有一个绿色的加号。选择一个 marker 泳道和需要计算分子量的泳道，每个泳道从上至下地创建，创建时注意在每个泳道条带的正中间开始创建，减少电泳时条带不整齐对结果计算的影响，并且创建的泳道线一定要垂直。

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电泳条带的识别：识别方式同样分为自动识别和人工识别。

自动识别的时候选择 Band—Detect Bands，这时会弹出一个 Detect Bands 的对话框。在 Detect Bands 对话框中有多个选项，可以依据实验需要进行调整。如果要自动识别所有 Lanes 上的 Bands 就选 Lands 后面的 All 选项；如果仅仅想自动识别某一条 Lane 上的 Bands 就选 One，然后在后面的框中填上想识别的泳道号码。

人工识别：选择 Band—Create Band，创建每个泳道中条带的位置。将鼠标移动至图片位置，鼠标后面同样出现绿色加号，用鼠标依次点击 marker 的条带位置。最后点击你所测定的目的条带。泳道中创建 Band 时也要在条带的中间位置创建，以免电泳时加量过多使跑出来的条带过宽，进而影响测定结果。

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Marker 的创建：选择 Match—Standards，点击 New Standard，输入所创建 marker 的名称，并依次输入 marker 的分子量（KDa 栏）和所对应的名字（Name 栏），点 Archive 保存。

再次点击 Match 菜单，选中刚编辑的 marker 名称，弹出所编辑的 marker 列表。点击列表左侧 Type1 所对应的箭头，再到图中所对应分子量的 marker 泳道中点击一下，此时 marker 泳道就自动产生了。

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标准曲线的创建：点击 Match 菜单，选择 Standard Curve，然后点击 marker 泳道条带 1 所在位置，弹出对话框，选择 Point To Point 点对点半对数的形式曲线，对话框右边选项全选，这时就创建好了 marker 的标准曲线了，所对应的分子量会自动生成。

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分子量测定：随后点击需要测定泳道的条带，分子量就会自动计算出来。

【注意事项】

使用 Quantity One 计算分子量对于所跑的电泳胶的质量要求非常高，所以在跑电泳时需格外注意，同时对样品的纯度要求也极为苛刻。

作者：丁香园论坛