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紧接上文，本文将主要讨论羊肚菌菌种分离中的孢子分离技术。 孢子分离既可以用有性孢子也可以用无性孢子作为分离材料。在适宜的条件下，使孢子萌发而获得纯培养菌丝体的过程即称之为孢子分离法。羊肚菌的有性孢子即子囊孢子，无性孢子即菌霜，由于羊肚菌无性孢子的具体功能扮演着不动精子的作用，极难以萌发，因此对与羊肚菌而言，孢子分离仅指有性孢子子囊孢子的分离。 羊肚菌的多孢分离是在没有遗传育种基础理论的前提下的一种菌种选育手段。有性孢子是经过减数分裂的子代，子代的性状相对于亲本而言必然已经发生未知的遗传变异（所谓是龙生九子各不同），多孢分离获得分离物是各种遗传性状混合的混合体，从混合体的出菇群体中选择性状优良的菌株进行组织分离，之后进行后续的品种选育实验是羊肚菌多孢分离遗传育种的基本流程。由于孢子分离获得是确定的遗传性状变异的分离物，因此不建议大规模生产使用。 羊肚菌多孢分离具体操作流程： 1，材料及用具的准备：100mL的锥形瓶、棉花塞子、回形针、解剖刀或剪刀、镊子、吹风机、待分离的羊肚菌标本，PDA培养基制作所需药品及器具等；
2，制作PDA琼脂培养基（制作方法百度搜索视频即可），将培养基约30mL置于三角瓶内； 3，将回形针制作成“Z”字形挂钩，挂在锥形瓶上，盖上塞子，塞子用牛皮纸或旧报纸捆着封口； 4，121℃，高压蒸汽灭菌30min；冷却后备用； 5，以下操作在超净工作台内完成：用吹风机冷风吹去羊肚菌菌盖表面的附着物和杂菌；之后用无菌的剪刀或解剖刀切取长宽0.5 ~ 1 cm的小块，凹坑朝下，钩在无菌的铁钩上，将铁钩悬于三角瓶内，塞好棉塞；
6，置于23℃下恒温培养箱内，6h后，将三角瓶从培养箱内拿出，在超净工作台内将挂钩连同组织块取出，继续盖上塞子，23℃培养，2～5天即可见到弹射出的孢子萌发出的小菌落； 7，仔细检查萌发的菌落，在超净工作台内，将菌落挑出至PDA斜面培养基上，获得多孢分离菌种。 （本文主要摘自《羊肚菌生物学与栽培技术》） |
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