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回顾上一期，我们发现并不是每篇高分的文章都适合我们模仿。今天我们开门见山，给大家介绍一篇适合模仿的文章——Macrophage autophagy protects against liver fibrosis in mice,来自Autophagy(IF=11.1)。乍看这个题目，其实讲的就是巨噬细胞在大鼠肝脏纤维化的作用。这并不是一个很新的题目，既然能发到10分以上的文章，机制这块必定是这篇文章的亮点。
首先作者将大鼠分为四组，分别为正常组，正常+rapamycin（自噬的激活剂），atg5-/-，atg5-/-+rapamycin，然后原代提取肝脏的巨噬细胞。通过免疫荧光发现atg5敲除的基因即使使用自噬激活剂以后，LC3的表达量也不高。其实这步是为了证实模型的成功与否。B-D图则是一个表型的呈现，证明atg5敲除能够加重CCl4大鼠肝脏的验证炎症表现。 然后作者开始探索机制，这里作者从活性氧（A-B）和MAPK通路（C-E）这两个方面进行阐述。这部分作者首先在未加抑制剂之前，观察活性氧和p-MAPK在基因敲除大鼠的巨噬细胞中表达是增加的，通过活性氧和MAPK的抑制剂，IL1A/B的产生减少。可见，自噬可以通过上述两条途径对巨噬细胞的炎症因子分泌产生影响。  上述都是细胞层面的实验，接着作者观察了自噬在大鼠体内的作用。A图说明了atg5基因敲除的大鼠的肝脏IL1A/B表达上调，而IL-6和TNF并没有明显改变。B图和C图，作者用免疫组化分别用ADGRE和MPO标记巨噬细胞和单核细胞，结果显示抑制自噬后这两种炎症细胞的浸润明显增加。D-E图中作者测了一系列巨噬细胞，单核细胞和中性粒细胞的标记物和一些趋化因子。结果都证明atg5基因敲除能够加重大鼠肝脏的炎症。  接下来，作者观察自噬对肝脏细胞坏死和凋亡的影响。结果均显示抑制自噬能够缓解肝脏细胞的坏死和凋亡的进程。  作者根据造模时间长短将大鼠分成两组，其中一组造模2.5周，另外一组造模4周。这一部分，作者先做了Sirus染色观察肝脏纤维化的程度，发现模型组一旦敲除atg5的基因，肝脏的纤维化的程度较模型组更加严重。然后作者用ACTA2标记纤维生成的细胞，发现这类细胞在atg5基因敲除的模型组中数量增加。而PCR显示与纤维生成相关的因子表达量同样明显增加。这部分通过动物实验证实了atg5基因敲除后能够加重肝脏的纤维化的过程。  紧接着，作者开始探讨IL1A/B在自噬调节肝脏纤维化过程中的作用。这一部分中，作者首先取肝脏肌成纤维细胞，分别培养在含有正常大鼠的巨噬细胞和经atg基因敲除后的巨噬细胞的培养液中。然后加入对照的IgG和IL1A/B的抗体。不难发现，CCl4大鼠经atg基因敲除后，促纤维生成的因子表达量明显增加，而使用IL1A/B的抗体后，纤维化的指标得到了一定的缓解。而将这些细胞分别培养在vehicle，IL1A和IL1B培养液中，相较于对照组，IL1A和B能够促进肌成纤维细胞表达纤维生成相关因子。  最后，作者回到动物实验，为了进一步验证IL1A/B的作用，作者使用了IL1的抑制剂。发现IL1的抑制剂能够缓解模型组和经atg5基因敲除的模型组大鼠的肝脏纤维化。同时该抑制剂也能缓解肝脏细胞的坏死。
通过上述一系列的分析，作者揭示了抑制自噬可通过上调IL1A/B的表达加重肝脏纤维化，促进肝细胞的凋亡和坏死，以及肝脏的炎症。再一次证实了自噬在肝脏纤维化过程中的重要地位。 之前和一位实验大牛聊天，他跟我说，如今如果做一个药物对一种疾病的作用的这类文章，越来越难发高分了。因为像这类文章无非就是证明该药物对这种疾病有用，然后再扯条通路出来。通路很多时候又是比较经典的通路，这个时候这类文章的创新性就大打折扣。 而这篇文章倒不是说具体看某个药物的作用，而是针对某些机制上的几个关键因子，然后使用抑制剂。像类似这种的，更能反映该机制在这个疾病中的一个作用。不同于药物，因为一个药物往往会涉及到很多通路来影响一个疾病。而我们做的过程中，往往是不假思索，先选条通路来做，做得通就继续往下做。但是这种思路有个最大的弊端，就是审稿人会质问为什么你要选择这条通路。这个是很多做药物试验的一个问题。我想这也是为什么说做药物这块的文章越来越难发的原因吧。当然这仅是我和我的小伙伴个人的看法，大家仅供参考吧。 |
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