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做过细胞转染的朋友，可能都有面临过这样的尴尬： 效率低 效率好低 效率非常低 HighGene 转染试剂是一种新型高效的阳离子聚合物。它可以与核酸（包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内，适用于大部分真核细胞的细胞转染，对于贴壁细胞和悬浮细胞转染同样适用。组分经过改良优化，性质稳定，重复性好，细胞毒性很低，转染后无需更换细胞培养液。 ・・・ 贴壁细胞转染 （以 HEK293T 细胞为例） 1. 第一天，将 HEK293T 细胞接种到 24 孔板中，细胞密度控制在 50%-70% 为宜；（注：根据实验需求，可以选择不同的细胞培养装置） 2. 第二天，取 1 μg 质粒加入到盛有 50 μL 无血清 DMEM 基础培养基离心管中，标记为 A 液；取 2 μL HighGene 转染试剂加入到另一个盛有 50 μL 无血清 DMEM 基础培养基离心管中，标记为 B 液；（注：MEM、1640、F12 等基础培养基均可用于 HighGene 转染试剂的溶剂） 3. 将 50 μL 含有 HighGene 转染试剂 B 液滴加到 50 μL 含有质粒 A 液中，用移液枪轻轻吹打几次混匀，室温静置 15～20 分钟； 4. 将 100 μL HighGene 转染试剂 / 质粒复合物均匀滴加到 24 孔细胞培养板孔中，轻轻摇动细胞培养板使其均匀分布； 5. 细胞转染 4～6 小时后，更换新鲜完全培养基；（可选） 6. 细胞转染 24～48 小时后，即可使用适当方式进行检测，如 RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等，或加入相应筛选药物（G418 或 Puromycin）获得稳定细胞株。 ・・・ 悬浮细胞转染 （以 HEK293F 细胞为例） 1. 第一天，将 HEK293F 细胞接种 30 mL 细胞悬液到 125 mL 摇瓶中，细胞密度控制在（1.0-1.5）×106 为宜； 2. 第二天，取 30 μg 质粒加入到盛有 1.5 mL DMEM 基础培养基离心管中，标记为 A 液；取 60 μL HighGene 转染试剂加入到另一个盛有 1.5mL DMEM 基础培养基离心管中，标记为 B 液； 3. 将 1.5 mL 含有 HighGene 转染试剂 B 液滴加到 1.5 mL 含有质粒 A 溶中，用移液枪轻轻吹打几次混匀，室温静置 15～20 分钟； 4. 将 3 mL HighGene 转染试剂 / 质粒复合物均匀滴加到盛有 30 mL HEK293F 悬浮细胞的 125 mL 摇瓶中，轻轻摇动摇瓶使其混合均匀； 5. 细胞转染 5 天后，根据蛋白表达的情况（胞内表达或分泌表达），收集细胞或细胞培养上清，进行后续蛋白纯化操作。 ・・・ 注意事项 1. 转染前细胞应处于良好的生长状态（对数生长期为佳），推荐细胞传代后 12～24 小时内、细胞密度为 60～70% 时进行转染； 2. 使用高质量的质粒有利于获得较高的转染效率，推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒抽提质粒； 3. 在细胞转染实验中，根据细胞转染效率可适当调整质粒与转染试剂的用量比例，一般质粒的量（μg）与 HighGene 转染试剂剂量（μL）使用比例在 1:1～1:4 之间，推荐比例为 1:2； ・・・ 互动福利 |
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