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真菌检查中的G试验和GM试验

 积一时之跬步 2018-11-17

G试验与GM试验,一字之差,很多人不明白这两个试验到底是什么回事。


G试验主要检测的是真菌的细胞壁成分(1,3)-β-D-葡聚糖, 这是真菌特有的生物学属性, 只要标本中检测到(1-3)-β-D葡聚糖, 就是诊断侵袭性真菌感染的依据, 再进一步进行菌种鉴定,就能指导临床科学合理的使用抗真菌药物。


GM试验检测的物质是半乳甘露聚糖抗原,常见于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断。GM释放量与菌量成正比,可以反映感染程度,连续检测GM可作为治疗疗效的监测,在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高。

从上表也能看出:G试验阳性,GM试验可能为阴性,如念珠菌属、镰刀菌属感染;G试验阴性性,GM试验可能为阳性,如隐球菌属感染。

G试验的临床应用

1、早期快速诊断:G试验可早于临床症状及影像学证据5-14天提示阳性。侵袭性真菌感染增多且复杂,早期症状无特异性,往往被原发病掩盖,病程长,发现较晚,死亡率高。真菌感染就医的患者,往往病情严重,传统的微生物分离、培养与鉴定需要时间较长,患者在等待期间有可能病情加重,甚至死亡。早期快速诊断真菌感染具有重要意义。

2、指导用药:快速确定真菌感染后,选择好治疗方案,有针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小,疗效高,价格适宜的药物提供准确的依据。

3、动态观察:可用于动态随访疾病的变化,(1-3)-β-D葡聚糖水平高低能够提示疾病的发展和预后。(1-3)-β-D葡聚糖水平在确诊IFI 患者的血清中出现持续升高,而随着药物的使用,对药物敏感者可很快出现(1-3)-β-D葡聚糖水平下降及转阴,而药物治疗无效人群(1-3)-β-D葡聚糖值无明显改变。

4、鉴别真菌种类:不同的(1-3)-β-D葡聚糖值可反映不同真菌菌种感染,如念珠菌感染者血清平均(1-3)-β-D葡聚糖值为755 pg/mL;曲霉感染者平均(1-3)-β-D葡聚糖值为110 3pg/mL;镰刀霉感染者平均(1-3)-β-D葡聚糖值为1652 pg/mL;隐球菌和接合菌(毛霉、根霉)细胞壁不产(1-3)-β-D葡聚糖,感染接合菌的患者血清(1-3)-β-D葡聚糖值为0。而对于口腔和其他器官的真菌定植患者,(1-3)-β-D葡聚糖值也较低,一般不超过20 pg/mL。

6、定植菌:多项研究表明,定植菌几乎不引起(1-3)-β-D葡聚糖升高,即使是严重定植。因此G试验阴性抗原区分定植菌和侵袭性感染。


G试验的临床问题解答

1.G试验与血培养结果不符

两种检测方法可联合作为判断检测结果的依据,血培养可以检测G试验不能检测的接合菌和隐球菌,G实验可以实现血培养不能达到的早期、快速、定量检测。

2.G试验为什么要强调连续检测

(1-3)-β-D葡聚糖水平是随着疾病过程而变化的。

我国许多侵袭性细菌感染诊断标准中均要求2次检测结果均大于诊断值才有诊断意义。在疾病早期重视连续检测,可避免出现漏诊或误诊。

3.哪些抗菌药物对G试验有干扰现象

文献报告磺胺类、阿莫西林/克拉维酸、头孢类药物可造成假阳性。

患者使用血液制品血液制品(白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等)血液制品中白蛋白和免疫球蛋白可激活G因子途径,对G试验影响很大。文献报告,静脉输入IgG 10g可使血浆G浓度升高达300pg/ml以上,这足以误诊为IFI。也有文献报告只有检测G试验前的两天内使用了大于30g的白蛋白,才会显著性影响检测结果。此外,静脉高营养液也常导致G试验出现假阳性(与含有葡萄糖酸盐成分有关)。

4.抗肿瘤药物或透析治疗及手术后多长时间检查G试验可避免假阳性

主要取决于相关药物的半衰期。血浆白蛋白或免疫球蛋白的平均半衰期为20小时,一周后复查可作为IFI的鉴别。对于服用抗肿瘤药患者,停药后一般48小时后可检测。

5.某些细菌败血症引起G试验假阳性的诱因

文献报道某些细菌败血症患者,机体内易产生许多炎症因子,该炎症因子可参与试验过程,引起假阳性结果。

6.假阴性的原因有

隐球菌和接合菌(犁头霉、毛霉、根霉)感染,但是也有文献认为隐球菌感染者有25%G试验可以阳性。

免疫复合物形成。

GM试验的临床应用

近10年来,临床侵袭性真菌感染的患者数量呈明显增长趋势,构成住院病人死亡的主要原因之一。其中侵袭性曲霉菌感染是构成真菌感染的最严重形式,曲霉菌感染主要发生在中性粒细胞减少症病人(抗癌治疗引起)和免疫抑制剂治疗的病人(器官移植,特别是骨髓移植)以及使用皮质激素治疗的病人中。通常开始于吸入环境中的曲霉菌孢子之后。由于曲霉菌几乎不能从血培养基中分离出来,其诊断通常建立在非特异性诊断或放射影像学检查结果上(临床症状,CT扫描,胸部X-光检查等),很难实现早期诊断。血清曲霉菌半乳甘露聚糖抗原检测的出现,为实现曲霉菌感染的早期诊断带来了巨大的临床价值,获得国内外医生的广泛认可,已成为侵袭性曲霉菌感染诊断的重要检测方法。

GM试验的临床问题解答

造成GM实验假阳性的因素主要有

1、使用了半合成青霉素,如哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸等。 

2、与其他细菌或真菌成分有交叉反应,例如马内菲青霉(多种青霉、拟青霉)、深红酵母、新生隐球菌 、头地霉 、顶孢霉、链格孢 、郁金香葡萄孢 、枝状枝孢霉 、多主枝孢霉 、尖镰孢 、宛氏拟青霉、产黄青霉、指状青霉、红色发癣菌 等。

3、肠道中定植的曲霉释放GM进入血液。

4、谷物食物中存在GM(如大豆),通过受损肠粘膜进入血液。

5、接受白蛋白、免疫球蛋白和其他营养液治疗。

6、多发性骨髓瘤。

7、血液透析(与纤维素透析膜中含有半乳糖成分有关)。

8、接受心肺旁路手术(与使用大剂量肝素有关)。

9、自身免疫性肝炎等免疫性疾病。

10、新生儿和儿童(FP 83%,与双歧杆菌交叉反应)。

造成GM实验假阴性的因素主要有

1、抗体多,出现前带现象。

2、释放入血的半乳甘露聚糖不持续,而很快被清除。

3、局部感染,包括慢性肉芽肿。

4、菌丝少,侵血管性弱。

5、非粒细胞缺乏患者( 对此现象的解释是由于中性粒细胞能吞噬并快速杀伤菌丝,使体内真菌载量降低,从而使释放入血液的GM 减少,此外,粒细胞表面存在甘露糖受体,可以结合GM,两者均导致GM试验出现假阴性结果)。

6. GM试验假阳性的因素除了以上原因外,还有其他未知的因素,需要在临床实践中发现和总结。避免假阳性的办法是多次重复检测。

吴井检验科

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