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前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由铜陵市质量技术监督局提出。 本标准由安徽省质量技术监督局归口。 本标准起草单位:铜陵市食品药品检验所。 本标准主要起草人:朱月辉、杨惠、管玉云、张振华、陈志勇、管大平。 1、范围 本标准规定了薄层色谱法、液相色谱法鉴定食品调料、汤料中罂粟壳的方法。 本标准适用于食品调料、汤料中罂粟壳成分--吗啡、罂粟碱、可待因的定性检测。 2、规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3、结构式 4、检验方法 4.1薄层色谱法 4.1.1原理 试样中的吗啡、罂粟碱、可待因等成分经萃取、离心等处理，除去干扰物质，浓缩、点样、展开后，显色，将样品生成的荧光斑点和斑点与对照品斑点比较。 4.1.2试剂 所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水；所用试剂如下： a)盐酸。 b)乙醚。 c)石油醚：沸程60～90℃。 d)氨水。 e)无水硫酸钠。 f)20％三氯乙酸溶液：取三氯乙酸20g，用水溶解，定容至100ml。 g)5％硅钨酸溶液：取硅钨酸5g，用水溶解，定容至100ml。 h)稀碘化铋钾显色剂：取碱式硝酸铋0.85g，加冰醋酸10ml与水40ml溶解后，即得。临用前取5ml加碘化钾溶液（取4g，用水溶解，定容至10ml）5ml，再加冰醋酸20ml，用水稀释至100ml。 i)亚硝酸钠乙醇显色剂：取亚硝酸钠5g，加60％乙醇使溶解，定容至1000ml。 j)对照品溶液：取吗啡、盐酸罂粟碱和磷酸可待因对照品各25mg，用甲醇溶解，定容至25ml，摇匀。 k)展开剂：甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（20:20:3:1）。 4.1.3仪器 4.1.3.1硅胶G薄层板。 4.1.3.2展开槽：10cm×10cm。 4.1.3.3酸度计。 4.1.3.4电动离心机。 4.1.3.5可调电炉：带石棉板。 4.1.3.6电吹风。 4.1.3.7紫外仪。 4.1.3.8电子天平。 4.1.4分析步骤 4.1.4.1试样处理 取样品500ml（固体或半固体样品则取500g，再加水500ml，浸提）加热使油层溶解，用纱布过滤后，用盐酸溶液调节pH至2，移至分液漏斗中。向分液漏斗中加入石油醚洗涤，弃去石油醚层，水液加热浓缩至约50ml，放置冷却至室温，加20％三氯乙酸溶液20ml，摇匀，离心（3500转/分钟，10分钟），取上清液，加5％硅钨酸溶液10ml，摇匀，搅拌5分钟，离心（4000转/分钟，20分钟），弃去上清液，加浓氨水置50℃水浴中至沉淀完全溶解,溶液转入分液漏斗中，用乙醚提取3次，每次30ml，分取乙醚层，用无水硫酸钠脱水，过滤，再用乙醚洗涤无水硫酸钠一次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇5ml溶解，摇匀，作为试样溶液。 4.1.4.2点样 离薄层板底端约1cm处标记。吸取3.1.2项下j）对照品溶液5μl、3.1.4.1项下的试样溶液20μl，点于同一硅胶G薄层板上。 4.1.4.3展开 在展开槽中预先倒入10ml3.1.2项下k），将已经点样的薄层板放入槽中，当溶剂前沿距离原点约8cm时取出，晾干。 4.1.4.4显色 将展开后的薄层板置紫外光灯（365nm）下检视；再依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液热风吹干后，日光下检视。 4.1.5分析结果判断 在与对照品色谱相应的位置上，若未显相同颜色的荧光斑点和斑点，则判为未添加罂粟壳。若显相同颜色的荧光斑点和斑点，则判为添加罂粟壳，并参照3.2液相色谱法进行验证。 4.1.6检出限 检出限：吗啡4.2mg/kg、盐酸罂粟碱0.21mg/kg、磷酸可待因26mg/kg。 4.2液相色谱法 4.2.1原理 试样中吗啡、罂粟碱、可待因经萃取、离心等处理，除去干扰物质，浓缩、过滤、进样，取一定量注入高效液相色谱仪，经分离用二极管阵列检测器、检测波长220nm、238nm检测，与对照品溶液比较。 4.2.2试剂 除同3.1.2中试剂外，还需以下试剂： a)乙酸铵（分析纯）。 b)甲醇（色谱纯）。 c)甲醇-乙酸铵溶液（0.02mol/L）(50:50)。 d)对照溶液：分别取吗啡、盐酸罂粟碱和磷酸可待因对照品25mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，取2ml溶液置10ml量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度。 e)试样溶液：取3.1.4.2项下试样溶液，经0.45µm微孔滤膜过滤后。 4.2.3仪器 4.2.3.1可调电炉：带石棉板。 4.2.3.2超声波清洗器。 4.2.3.3酸度计。 4.2.3.4电动离心机。 4.2.3.5高效液相色谱仪：带二极管阵列检测器。 4.2.4液相色谱测定条件 4.2.4.1不锈钢柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。 4.2.4.2检测器：二极管阵列检测器，检测波长：220nm、238nm。 4.2.4.3流动相：甲醇-乙酸铵溶液（0.02mol/L）(48:52)，经0.45µm微孔滤膜过滤，超声脱气。 4.2.4.4流速：1.0ml/min。 4.2.5测定 分别取对照品溶液及试样溶液各10µl，注入高效液相色谱仪进行分离、检测，记录色谱图。 4.2.6分析结果的判定 若样品中主峰的保留时间与对照品峰保留时间一致，则判定为添加罂粟壳；否则，则判定为未添加罂粟壳。 4.2.7检出限 检出限：吗啡0.1mg/kg、盐酸罂粟碱0.1mg/kg、磷酸可待因0.1mg/kg。 资料来源：DB34/T1840—2013 |
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