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小林，我一直用你家的Ficoll-Paque细胞分离液，性能稳定，性价比高，但是最近我发现分离样品时出现了一些小问题。。。   客户  小林  啊。。。您先别急，先来看看这篇文章吧，您的疑惑肯定能解决的！    问：分离后发现得到的淋巴细胞中有较多红细胞污染  回答 原因1：温度太低。Ficoll-Paque是一种密度梯度离心介质，在低温条件下，Ficoll-Paque本身的密度较高，因而红细胞的聚集效果比较差，红细胞和粒细胞不能很好地穿透Ficoll-Paque层而造成结果污染。合适的分离温度应保持在18到20oC。 原因2：离心速度不够或离心时间过短。必须保证足够的离心时间及离心力以保证不同细胞具有合适的分层。 问：单个核细胞的收率较低，且活性较差 回答 原因：温度过高。在温度较高的情况下，Ficoll-Paque产品的密度较低，因此某些淋巴细胞可穿透Ficoll-Paque层，细胞的活性也会同时受到影响。合适的分离温度应保持在18到20oC。  问：单个核细胞的得率较低但活性正常 回答 原因：血液样品与平衡盐溶液未按照1:1稀释，通常样品中红细胞压积较高；由于样品中红细胞压积较大，大量淋巴细胞被阻截在红细胞聚集区内，建议对样品进行适当稀释。 问：单个核细胞的得率较低，且带有粒细胞污染 回答 原因：离心机不稳定，导致密度梯度的波动。波动可能带来单个核细胞层的条带变宽，从而与底层细胞混合。建议检查离心机是否配平合适，并检查离心机状态。 问：单个核细胞得率较低，活性较差，且存在其他细胞污染 回答 原因：可能存在其他病人血液样品、陈旧血液样品、非人类血液样品、或非外周血样品等的污染。在这种情况下，可以考虑根据实验情况，采用Percoll™ PLUS细胞分离液，可能效果更好。 本期内容到此结束啦！ |
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