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编者按 你还在为血清的储存和使用方法烦忧吗！在面对血清沉淀物时还不知所措吗！！小编今天以科学的实验数据为你“排忧解难”。 血清是什么 血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体，是血浆去除纤维蛋白原后的混合物。主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类和维生素、多肽（如生长因子、胰岛素、促生长激素）等。血清是细胞培养过程重要的营养物质，同时也对细胞起到一定的保护作用。 HyClone有着50年的血清生产经验，每个批次的血清均有来源地证明。为了确保瓶间的均一性和一致性，分装前，每个批次都经过过滤并混合（“真混合”工艺）。 现在我们以具体实验来说明血清该如何储存和使用。  材料与方法 选取任一批次的HyClone Cosmic CalfTM Serum（加强型小牛血清）和HyClone Characterized Fetal Bovine Serum（优级胎牛血清）用于此研究。每个批次选取5瓶并标记1X到5X。瓶1X保持冻存状态，瓶2X到5X常温解冻。在解冻过程中，每20-30分钟混合操作一次。待完全解冻后，立即于-20℃下重新冻存并过夜。瓶3X至瓶5X分别再进行1次、2次、3次冻融。 生长研究 选取5种细胞株，测定各个血清的培养性能。表1中列出了细胞株及基础培养基的类型。所有的培养基需添加10%的待测血清。针对贴壁细胞，以1.0×104/cm2的密度接种到T25培养瓶中（三个平行试验）。当细胞融合率达到90%时，计数。若为悬浮细胞，以8.0×103/mL的密度接种到T25培养瓶中，从第三天开始，每天计数一次，直到细胞活率下降（培养条件：37℃5%CO2）。 生化分析 所有瓶装血清样品进行生化实验测定，确定血清成分是否有明显变化。 沉淀分析 比浊法测定样品中的沉淀物，并通过肉眼检测的方法判断多次解冻/冻存是否会增加微粒物质的数量。  结果与讨论 图1-图5体现了细胞生长的结果，细胞密度没有明显的变化。表2为生化分析的结果，表明血清成分没有明显的变化。浊度分析结果（表3）表明微粒物质的数量同样没有明显的变化。所有结果都经肉眼确认。        结论 血清重复冻存和解冻 经过5次解冻/冻存循环的血清在细胞生长性能、生化分析数据和浊度方面没有明显的变化，我们认为血清经多次解冻/冻存循环（可达5次）之后，不会影响细胞的生长。虽然测定数据显示，经过多达5次解冻/冻存血清性能并未出现明显的下降，但反复冻融会造成血清的沉淀增多，给后续处理带来麻烦，我们建议血清的解冻/冻存次数越少越好。 血清储存和使用方法 我们建议血清储存在-10℃或更低温度条件下。产品效期是基于-10℃储存条件的稳定性研究。然而，研究表明储存在-80℃下的血清，在性能方面也没有任何变化，但我们建议不要在-80℃条件下储存，解冻时巨大的温差会导致更多沉淀的产生。一旦解冻，血清可在2-8℃条件下储存6周，且维持产品质量。如果解冻之后的血清储存时间大于6周，我们建议分装成合适的体积并重新冻存。 血清解冻方法 首先将冻存的血清移到2-8℃的冰箱中，过夜；于37℃水浴，间歇性摇晃混匀底部的溶解物。解冻之后的血清不要长时间放置在37℃下。若血清没有混匀且放置于高于40℃的水浴中，底部的蛋白会变性形成沉淀。不推荐高温解冻血清。在解冻或长时间储存之后，血清中会出现浑浊物和絮状物。在解冻过程中，需不断的摇晃混合以阻止形成梯度及沉淀。由于血清的不同成分解冻速率不同，当解冻时，若无混合操作，会形成一个梯度。如果血清一直保持此梯度状态，随后会形成沉淀。 最后再给大家带点福利，认清血清沉淀的“真面目”。 用于细胞培养的胎牛血清及其它血清产品存在各种类型的沉淀。除了胆固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也会含有纤维蛋白和磷酸钙。虽然沉淀可引起初始问题，但在细胞培养应用方面，沉淀不会对血清的性能产生影响。 纤维蛋白 血清中的纤维蛋白通常为肉眼可见的较大物质（可达1-2 mm）。由于血清在低温条件下收集并迅速加工处理，导致一些纤维蛋白原（纤维蛋白的前体）仍存在于溶液中。在过滤之后，血清中的纤维蛋白凝固并沉淀。 磷酸钙 磷酸钙也是血清产品中常见的沉淀，通常表现为云状物。倒置显微镜观察，发现许多小黑点。由于布朗运动，这些黑点可自由移动。 磷酸钙沉淀物通常被误认为微生物污染。在37℃孵育之后，血清中的磷酸钙沉淀物会增加。因此，我们建议不要直接用37℃孵育的血清测试无菌性。将1 mL的待测血清直接倾倒于细菌琼脂平板（例如胰酪蛋白胨大豆琼脂），37℃培养之后观察菌落的生长情况。油镜（放大1000倍）下观察革兰氏染色，判断是否污染。 细胞生长 测试及经验表明，沉淀不会改变血清作为培养基添加物的性能。这已经被客户及其它厂家证实。 过滤 如果血清中含有大量的沉淀，我们不建议进行过滤血清。若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管中，以400g稍微离心，上清液可接着加入培养基内一起过滤。 沉淀物的控制 血清中的沉淀很难预测和阻止，沉淀不会改变血清的性能，但在正确的储存和使用操作会降低血清中沉淀的析出。 如下条件会增加沉淀： ·血清热灭活； ·37℃孵育； ·重复冻存与解冻操作； ·解冻工程中为未混合； ·γ-辐照； ·2-8℃长时间储存； ·在自动解冻的冰箱中储存； 最后附上HyClone产品的授权经销商名单  数据来源： |
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