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大家好，我是转录调控的小R，又和大家见面啦~ 俗话说“过了腊八就是年”，昨日各位小主有没有喝腊八粥、吃腊八面？农历己亥新年还有二十多天就到啦~金猪纳福，好运滚滚，在这里，小R给各位小主带来一份新春贺礼，携转录调控事业部的小伙伴们给大家拜个早年咯~ ONT甲基化重磅来袭！  甲基化是什么？ DNA甲基化是表观遗传的经典修饰方式，其并不改变基因的碱基序列，而是通过改变基因的表达影响细胞的功能，在调控基因表达、维持染色质结构、基因印记、X染色体失活以及胚胎发育等生物学过程中发挥着重大的作用。DNA 甲基化的形式多种多样，主要包括 C5-甲基胞嘧啶（5mC）、N6-甲基腺嘌呤（6mA）等。 目前市场常用重亚硫酸盐法检测5mC，其精确度高，但化学处理会导致DNA分子的片段化、测序深度高、无法鉴定更多修饰类型。Nanopore技术作为新一代基于纳米孔的单分子实时电信号测序技术。截至目前，全球范围内基于Nanopore平台进行的甲基化研究文章近10篇，见刊于nature methods、bioRxiv等国际知名期刊。 甲基化怎么做？ 不同于传统的甲基化检测方法，使用ONT平台进行测序前，不需要再对DNA样本进行化学处理，避免了人为因素和化学因素的影响。我们来看看具体怎么做的吧~ 1) 提取高质量基因组 DNA，利用Nanodrop、Qubit 和 0.35% 琼脂糖凝胶电泳进行纯度、浓度和完整性质检； 2) 将基因组DNA打断成平均8kb左右； 3) 使用SQK-LSK109连接试剂盒（ONT官方试剂）进行文库构建，包括DNA 损伤修复和末端修复、接头连接、磁珠纯化等； 4) 使用Qubit 进行文库定量。 呐~只需简单几步，短短一个多小时，就能将前期样品处理好啦~ 甲基化建库流程 待文库构建完成后，就要上机测序咯~ 前面已经跟各位小主介绍过，ONT 测序是新一代基于纳米孔的单分子实时电信号测序技术(百迈客与Oxford Nanopore公司合作-斥巨资引进Nanopore全测序平台)，由于 DNA 链上不同碱基化学性质存在差异，所以当单个碱基通过纳米孔通道时，会产生不同的电信号，而当存在碱基修饰时，同一位置的电信号也会有所差别。基于此，软件则将这些电信号进行识别，判读为不同的修饰信息。 ONT 电信号识别 ONT甲基化的优势在哪里？ 啰嗦了这么久，小R给各位小主总结一下，ONT甲基化测序的好处到底有哪些吧~ 1) 单碱基水平检测，无中间处理，不扩增、不富集，真实还原碱基修饰信息 2) 测序读长长，避免短读长带来的拼接比对错误，鉴定准确 3) 鉴定种类丰富，5mC、6mA多种碱基修饰一次搞定，性价比高 4) 可进行等位基因特异性甲基化检测 ONT 甲基化实测数据如何？ 小R很低调，一直希望用实力证明自己！为了能让各位小主安心，百迈客对某粮食作物进行了WGBS（30X）和ONT（30X）甲基化两种测序策略效果对比，结果发现，以CpG修饰为例，ONT测序结果与WGBS结果一致性在0.97左右，相关性达到0.9以上，充分说明了ONT甲基化结果可靠！ ONT 甲基化成功案例有哪些？ 使用ONT平台进行甲基化研究可谓日渐火热啊，截至目前，已经有十多篇文章发表，研究学者的热情日益高涨啊~小R将目前见刊的文章给大家进行了汇总，方便各位小主查阅哦~ 自从2017年开启第一个ONT平台研发立项，百迈客不断探索与前进，经过一年多时间的沉淀与磨砺，百迈客Nanopore测序技术已经逐步成熟并且达到稳定状态。截至目前，百迈客已拥有3台ONT最高通量测序仪PromethION，并建立超过上百种物种类型的文库，拥有大量的项目经验！无论是技术还是项目经验上，我们都实力过硬！ 各位小主还在等什么？？！！心动不如行动，和小R一起携手，加入ONT测序大军吧！  400-600-3186 工作时间: 周一至周五9: 00-18: 00
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