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根及根茎类中药煮散与 传统饮片有效成分煎出量对比研究 刘起华1,文谨1,章军2, 彭智平1,王松1,仝小林1通讯作者 (1中国中医科学院广安门医院,北京100053;2中国中医科学院中药研究所,北京100700) 中药煮散与中药汤剂同属于中药液体剂型范畴,具有吸收快､疗效迅速等特点,同时保持了传统汤剂灵活加减,随证施量的煎煮过程和疗效,使药物能在煎煮过程中相互作用｡煮散以其独特的粗粉颗粒进行煎煮,较之传统饮片汤剂又有其独特的优势,在保证疗效的同时能减少药材使用量､节省能源､煎出率高等,这些已被现代研究和临床实践所证实｡目前,根及根茎类中药约占整个植物类药材的1/3,而临床处方用药量逐渐增大,部分药材资源紧缺,价格不断上涨,若将此类药材以煮散形式应用于临床,不失为解决现代中药药材紧张的有效途径之一｡ 本文以葛根芩连汤中药味为研究对象,葛根芩连汤出自张仲景的《伤寒论》,由葛根､黄芩､黄连､炙甘草组成,葛根､黄芩､甘草､黄连均为根或根茎类中药｡葛根主要含葛根素､大豆苷等成分,黄芩主要含黄芩苷､汉黄芩苷､黄芩素等成分,黄连主要含小檗碱､黄连碱､药根碱､巴马汀等成分,炙甘草主要含甘草酸铵､甘草苷等成分｡本实验分别对四种饮片及煮散的煎出固形物､煎出液中有效成分的含量进行对比研究,初步得出四种药味煮散与饮片煎煮所得主要有效成分的化学剂量对比关系,为煮散替代饮片应用于临床提供科学依据｡ 材料 1药物与试剂 葛根､黄芩､黄连､炙甘草购于北京双桥燕京中药饮片厂,葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Wild.)Ohwi的干燥根,黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensisGeorgi.的干燥根,黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensisFranch.的干燥根茎,炙甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensisFisch.的干燥根及根茎经蜜炙加工的炮制品,经检验均符合2010年版《中国药典》一部的规定｡ 2仪器 LC—20A高效液相色谱仪(日本岛津公司,配有LC solution工作站);BP211D天平(德国Sartorius公司)｡ 方法与结果 1单味药指标成分的检测方法 1.1葛根含量测定 1.1.1色谱条件Hypersil ODS色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相甲醇-0.02%磷酸溶液(25∶75);检测波长250nm;流速1.0mL·min-1;柱温40℃｡对照品进样量5μL,供试品进样量10μL,色谱图见图1｡  1.1.2标准曲线及线性范围取葛根素､大豆苷对照品适量,精密称定,加甲醇稀释,得到质量浓度为122.8,43.36μg·mL-1的混合溶液,作为对照品溶液｡精密吸取混合对照品溶液2,4,6,8,10,12μL注入液相色谱仪,按上述方法测定,以峰面积积分值(Y)为纵坐标,以进样量(X)为横坐标进行线性回归｡葛根素回归方程为Y=3819716X+555.1(r=0.9999),线性范围0.246~1.474μg;大豆苷回归方程为Y=3755705X-1903.7(r=0.9999),线性范围0.087~0.520μg｡ 1.1.3供试品溶液的制备精密量取葛根水煎液样品各1mL,加甲醇稀释至5mL,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得｡ 1.2黄芩含量测定 1.2.1色谱条件Hypersil ODS色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相甲醇-0.2%磷酸溶液(47∶53);检测波长为280nm;流速1.0mL·min-1;柱温35℃｡对照品进样量5μL,供试品进样量10μL,色谱图见图2｡  1.2.2标准曲线及线性范围取黄芩苷､汉黄芩苷､黄芩素对照品,精密称定,加50%甲醇稀释,得到质量浓度为123.24,92.16,57.42μg·mL-1的混合溶液,作为对照品溶液｡精密吸取混合对照品溶液2,4,6,8,10μL注入液相色谱仪,按上述方法测定,以峰面积积分值(Y)为纵坐标,进样量(X)为横坐标进行线性回归｡黄芩苷回归方程为Y=2443898X-4755(r=0.9999),线性范围0.246~1.23μg;汉黄芩苷回归方程为Y=3152290X-3458(r=0.9999),线性范围0.184~0.922μg;黄芩素回归方程为Y=5284136X-37637(r=0.9997),线性范围0.115~0.574μg｡ 1.2.3供试品溶液的制备精密量取黄芩水煎液样品各1mL,加甲醇稀释至5mL,摇匀,再精密量取1mL置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得｡ 1.3黄连含量测定 1.3.1色谱条件Merck Chromolith RP-18e色谱柱(100mm×4.6mm,2μm);以0.05%磷酸(含0.01mol·L-1磷酸二氢钾)为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱,0~15min,8%~14%B;15~25min,14%~16%B;25~45min,16%~38%B;检测波长345nm;流速:2mL·min-1;柱温:35℃｡对照品进样量10μL,供试品进样量10μL,色谱图见图3｡  1.3.2标准曲线及线性范围取黄连碱､药根碱､小檗碱､巴马汀对照品,精密称定,加50%甲醇稀释,得到质量浓度为36.92,34.96,74.56,47.12μg·mL-1的混合溶液,作为对照品溶液｡精密吸取混合对照品溶液2,4,6,8,10,12μL注入液相色谱仪,按上述方法测定,以峰面积积分值(Y)为纵坐标,进样量(X)为横坐标进行线性回归｡黄连碱回归方程为Y=3307820X-4317(r=0.9999),线性范围0.074~0.443μg;药根碱回归方程为Y=3597630X-2036(r=0.9999),线性范围0.070~0.420μg;小檗碱回归方程为Y=2909778X-3886(r=0.9999),线性范围0.14~0.895μg;巴马汀回归方程为Y=3585734X-2870(r=0.9999),线性范围0.094~0.565μg｡ 1.3.3供试品溶液的制备精密量取黄连水煎液样品各1mL,加甲醇稀释至25mL,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得｡ 1.4甘草含量测定 1.4.1色谱条件Hypersil ODS色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈为流动相A,以0.5%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱, 0~8min,81%B;8~35min,81%~50%B;35~36min,50%~0%B;36~40min,0%~81%B;检测波长237nm;流速:1mL·min-1;柱温35℃｡对照品进样量5μL,供试品进样量10μL,色谱图见图4｡  1.4.2标准曲线及线性范围取甘草酸铵､甘草苷对照品,精密称定,加50%甲醇稀释,得到质量浓度为67.80,63.66μg·mL-1的混合溶液,作为对照品溶液｡精密吸取混合对照品溶液2,4,6,8,10μL注入液相色谱仪,按上述方法测定,以峰面积积分值(Y)为纵坐标,进样量(X)为横坐标进行线性回归｡甘草酸铵回归方程为Y=492328X-638.4(r=0.9999),线性范围0.136~0.678μg;甘草苷回归方程为Y=1794240X-915.8(r=0.9999),线性范围0.127~0.637μg｡ 1.4.3供试品溶液的制备精密量取甘草水煎液样品各1mL,加甲醇稀释至5mL,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得｡ 2统计学分析 测定结果采用SPSS19.0软件进行t检验统计分析｡ 2.1煮散与饮片有效成分煎出量的比较 2.1.1煮散煎液的制备将饮片粉碎为煮散颗粒,精密称取5g,加20倍量水,浸泡20min,煎煮20min,煎煮1次,纱布滤过,滤液定容至100mL,备用｡ 2.1.2煮散煎煮法制备饮片煎液(A液)精密称取饮片5g,加20倍量水,浸泡20min,煎煮20min,煎煮1次,纱布滤过,滤液定容至100mL,备用｡ 2.1.3常规煎煮法制备饮片煎液(B液)精密称取饮片5g,浸泡20min,煎煮2次,第1次加6倍量水,第2次加6倍量水,各煎煮30min,纱布滤过,滤液合并,定容至100mL,备用｡ 2.1.4干膏率测定精密移取各样品水煎液10mL,分别置于已干燥至恒定质量的蒸发皿中,水浴蒸干,于105℃干燥3h,置干燥器中冷却0.5h,迅速称定质量,计算干膏率,结果见图5~图8｡ 2.1.5有效成分含量测定结果葛根､黄芩､黄连､炙甘草中水煎液有效成分含量测定结果见图5~图8｡ 结果表明,对比分析煎煮液中有效成分的含量,葛根煮散为饮片(A)的1.7倍(P  结果表明,对比分析煎煮液中有效成分的含量,黄芩煮散为饮片(A)的1.4倍(P 结果表明,对比分析煎煮液中有效成分的含量,黄连煮散为饮片(A)的1.6倍(P  结果表明,对比分析煎煮液中有效成分的含量,炙甘草煮散为饮片(A)的2.5倍(P 讨论 以块状或段状形式存在的根及根茎类饮片,质地或硬或坚实,溶剂不易进入细胞组织溶解其有效成分,经过适当的粉碎,在一定程度上破坏了细胞组织,增大了表面积,改变了物理形态,根据Fick第一扩散定律,物质的扩散量正比于药材的比表面积,增加药材的比表面积进而能增加药物浸出效率,即粒度变小提取率均明显升高｡不同的根及根茎类饮片与煮散在相同煎煮条件下有效成分煎出量倍数不一致,可能与饮片自身的物理形状､比表面积､孔隙结构等有关｡课题组研究发现黄连饮片若为圆柱形段状,煮散有效成分煎出量可达到饮片的4倍,由此亦可见,临床使用饮片的性状规范也极为重要,直接影响其煎煮效果｡甘草饮片的显微结构显示其致密组织较多,则可能会影响有效成分从细胞中的溶出,而制成煮散可破坏其组织结构,使成分易于溶出,因此两者煎出效果差异较大｡ 本文通过对比根及根茎类煮散与饮片的两种煎煮方法中煎出液中有效成分的含量,进一步证明了煮散具有比饮片煎出速率快,煎出量高,煎出效果优于传统饮片的特点,从而为根及根茎类煮散代替传统饮片提供了化学研究的实验数据｡本实验选择了4种药味中多种代表性成分进行分析测定,在一定程度上反应了煮散与饮片的化学对比剂量关系,为更准确､全面反映煮散所能节省药材的量,则还需多方面综合考察,课题组将采用指纹图谱技术进行量的比较,并结合成方进行研究,为煮散在临床的使用提供更为科学的依据｡至于能否达到减量等效的药理效应,则尚需进一步研究｡ 煮散是一种比饮片更宜取得药用成份的形式,在相同条件下可节约药材,降低治疗费用,更宜于被患者接受,具有显著的社会效益和经济效益,有必要做广泛深入的研究｡ |
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