关于RNA提取方法：你不知道的前世今生

RNA，学名核糖核酸，其简称来自于RiboNucleic Acid，是由至少几十个核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的一类核酸。

 

探索RNA的前提是提取到无污染的Total RNA，而RNA提取的基本原理大致可以概括为：

1、先破碎细胞

2、随后去除大分子杂质（蛋白质、脂类、DNA等）

3、最后沉淀RNA同时去除盐类、有机溶剂、进一步纯化RNA

提取方法的前世今生

第一代RNA提取方法是一位名叫Piotr Chomczynski的老爷爷和Nicoletta Sacchi老奶奶一起发明的TRIzol沉淀法（所用试剂包括异硫氰酸胍、苯酚、氯仿等），因为这项发明让RNA的提取迅速简便，从此开启了RNA研究的热潮。

后来老爷爷把这个专利卖给了Invitrogen，Invitrogen将此方法推广到世界，成为了目前使用甚广的方法。

再后来Invitrogen就被Thermo收购啦！

代表产品：Invitrogen的TRIzol试剂

但TRIzol沉淀法需要多次沉淀抽提RNA，所用试剂有毒性且操作时间较长。

因此，第二代柱式加酶纯化的方法应运而生，采用硅胶膜作为核酸的特异性吸附材料，最大程度地回收样品中的RNA，同时去除其他杂质。

二代方法在稳定性能的基础上简化了操作，减小了危险系数，提高了RNA提取效率。

代表产品：QIAGEN的RNeasy和国内大多数产品

不过一、二代方法都需要使用DNase来去除DNA污染，这就给后续的下游实验带来了些许不便。残留的DNase会降低逆转录效率，减少了第一链cDNA合成，从而影响结果的准确性。

 

因此，第三代提取方法又在二代的基础上进行了优化，实验无需添加任何酶，只要两根柱子，即可轻松获得RNA。

柱子1：DNA-Cleaning Column清除DNA

柱子2：RNA-only Column特异性吸附回收RNA

这样简洁的操作不仅节约时间，还能方便下游实验的操作哦！

代表产品：QIAGEN的RNeasy Plus和福际生物的RNA纯化系列产品

(RNeasy Plus)

(福际植物总RNA提取)

悄悄告诉你哦！福际RNA试剂盒还赠送超级好用的RNA酶清除剂（RNase Eraser），1min即可彻底清除固相表面400μg的RNase，还不添加任何对人体有毒害的物质哦！

 

如果觉得文字太长记不住，小编直接上图给你看。

图1：操作流程对比图

福际产品只需两首歌的时间就能完成RNA提取，不要太让别人嫉妒你的实验进度哦！

图2：实验结果对比图

第一代（1：TRIzol）

第二代（2：QIAGEN的RNeasy ）

第三代（3：QIAGEN的RNeasy plus,4：Foregene）

图3：qPCR图（扩增曲线图）

第一代（绿色表示TRIzol -，红色表示TRIzol +）

第二代（天蓝色表示QIAGEN RNeasy-，红色表示QIAGEN RNeasy +）

第三代（蓝色表示QIAGEN RNeasy plus，绿色表示Foregene）

（注：qPCR图'-'表示未加DNase，未去除DNA的污染，因此CT较靠前，结果不准确；'+'表示加入DNase，已去除DNA污染，结果准确）

 

每一次技术的升级都意味着实验的操作朝着更为简单和人性化的方向发展。

福际生物旨在帮助更多的科研人员节约实验时间与成本，获得高质量的实验结果，共同创造出更多有价值的科研成就。