请教各位大神,敝人从上海吉玛订的siRNA(A套餐),其中包括NC-FAM,于是这几天按照invitrogen的protocol做了转染,但是转染24h和48h均未观察到荧光,视野下一片漆黑,什么都没有,不知道是什么原因,百思不得其解! 转染过程严格避光,不存在猝灭问题,我将siRNA贮存液(20umol)滴到载片上置于荧光显微镜下观察,绿色荧光非常强烈,说明试剂有效,但是我就是想不通为什么转染48h还没有一点荧光,求各路高手解答,谢谢! 附我的转染步骤:我做的是子宫内膜间质细胞,种在6孔板,细胞均匀分布,接种24h之内细胞密度达到70%左右做的转染。(1)转染前30min按1.5ml/孔给细胞换液,放回孵箱;(2)每孔250ul无血清培养基溶解5ul siRNA,轻柔混匀,室温静置5min;(3)每孔250ul无血清培养基溶解10ul Lipofectamin2000,轻柔混匀,室温静置5min;(4)将充分溶解的siRNA和Lipofectamin2000混合,轻柔混匀,室温静置20min;(5)将上述混合物加入孔板中,完成转染。转染后6h用完全培养基换液。转染后24h、48h、72h和96h分别收取细胞沉淀,NC-FAM组在荧光显微镜下观察,检测转染效率。 [ 来自小组 生物医药家族 ] |
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