细胞免疫荧光

所需液体：①TBS（0.1%Tween 20清洁剂，1ul:1ml）②TBST（0.1%Triton破膜剂）

③5% BSA（牛血清白蛋白，封闭抗原，2.5g:50ml）④⑤​

 

一、爬片：1-2天前，24孔板，爬片，10⁴数量级，1ml。    TBS 10min×3，500ul              （酒精浸泡，火烧，放入前孔内先滴一滴液体，防止2层爬片）  

二、固定：4% 多聚甲醛，室温20min，200ul。     TBS 10min×3，500ul 

三、通透：  TBST（0.1%Triton破膜剂），室温7min，500ul。   TBS 10min×3，500ul

（适用于胞质或核上蛋白，后续可用TBST配；膜上蛋白不要通透，后续不用TBST，要用TBS配液）

四、封闭：  TBST+5% BSA，室温1h，200ul。

五、一抗： 5% BSA稀释(1:200-1000), 4 ℃过夜或室温1 h,100ul。   TBS 10min×3

六、二抗： 5% BSA稀释(1:200)，避光，室温1 h,100ul。    TBS 10min×3

七、DAPI：2滴/ml,室温15min,100ul。    TBS 10min×3

八、封片： 抗荧光衰减封片剂，细胞面朝下，晾干或吸干，指甲油，避光盒-20°保存。

（1ml针头针尖向背面做个小钩，轻轻勾起，用小镊子取出）

九、观察：全自动电子倒置显微镜