磁珠法纯化目标样品,受到广大科研用户的欢迎,其原因在于:操作简单,提取快速,可实现自动化,通量较高。安全无毒,减少了苯酚氯仿等有毒试剂的使用。提取纯度高,产物浓度大降解少。下方视频介绍了磁珠法的纯化过程。 本期将为大家介绍如何利用磁珠法纯化NDA片段,如PCR产物,酶切产物。对于这些DNA片段您能想到哪些回收方法呢?最先想到的很可能是切胶回收或者溶液回收,胶回收实验可谓是每位分子实验同学的必备技能,传统的切胶回收,需要进行电泳,紫外照胶时间过长会导致DNA分子损伤或造成碱基突变,EB等试剂有生物危害性,回收过程时间长且回收效率不高,一起来看看Sera-Mag Select磁珠法的纯化过程。 ❖DNA酶切电泳图 Sera-Mag Select试剂按照不同的比例添加到DNA混合物中,根据添加比例的不同,可以结合不同片段大小的DNA,下图为PCR产物的磁珠回收实例: 将0.8倍体积的磁珠加入到PCR产物中,PCR产物被磁珠捕获,而小片段的引物二聚体和PCR溶液中酶以及离子等被完全去除,整个过程仅仅需要几分钟。通过这个实例,大家简单了解了一下磁珠筛选的过程,那么磁珠如何才能从多个条带中回收目的条带呢?首先简单的介绍磁珠筛选DNA的原理。 磁珠的量增加后吸附DNA的片段范围会更宽,因此可以根据目标DNA的片段大小选择合适的磁珠/样品体积比。那么如何通过磁珠法纯化中间位置大小的DNA呢? 怎样获得蓝色框线处的DNA呢?小伙伴们能否根据这个图能给出相应的方法呢?赶快公布我们的答案: 1. 首先加入0.4倍体积的磁珠,进行大分子量DNA的吸附去除。由于磁珠吸附的是大分子杂质,所以分离后弃去磁珠。 2. 增加磁珠的体积至0.45倍,此时目标DNA被磁珠吸附,分离后弃去上清,收集磁珠。 3. 乙醇洗涤磁珠后,加入洗脱缓冲液进行DNA的洗脱回收。 最终目标DNA从混合液中被分离纯化出来,这个方法是不是很方便?磁珠纯化的优点是速度快,回收效率高,无DNA机械损伤,结果稳定且重复性极好,Sera-Mag Select可以很好的纯化分子量大于或等于100bp的DNA片段。很多NGS二代测序的小伙伴已经对磁珠纯化产品非常熟悉了,借此机会把这个好方法分享给大家。 注:文中内容来自GE 中源生物是GE公司授权的北方区总代理 如有相关问题请拨打免费服务电话咨询 400-8100-881 如您对我们的服务有任何的意见和建议请发至如下邮箱 service@sinozhongyuan.com 中源生物 专业服务,助力科技 推动生命科学事业,服务于全人类健康 建立中国专业的生命科学领域产品经销平台 |
|