|
抗线粒体抗体Ⅱ型又简称为AMA-M2，是原发胆汁性肝硬化(primary biliary crrhosis ,PBC)的早期特异性诊断指标，其诊断PBC的敏感性和特异性分别超过90%和95%，为PBC最突出的免疫学异常指标，也是PBC最重要的诊断手段，因此，被列为PBC的诊断标准之一[1]。 PBC由Ahrens等，于1950年命名，是一种原因未明的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，其病理特点为：肝内胆管非化脓性炎症，伴有胆管破坏、门脉周围炎症及肝实质碎屑状坏死，最终进展为肝硬化。PBC预后不良，激素和其它免疫抑制剂疗效不确定，熊去氧胆酸是唯一可以长期使用的有效治疗药物，早期应用可延缓肝硬化和改善高胆红素血症，至晚期则效果甚微，终末期PBC唯一有效的治疗是肝移植[2]。 因此，针对该病，最好的诊疗方案是早期诊断，早期治疗，及早给药，改善预后。抗线粒体抗体Ⅱ型作为PBC的早期特异性诊断指标，可在患者出现临床症状、生化指标和组织学特征变化之前几年甚至十几年即出现阳性，还有研究认为：AMA-M2抗体阳性者,即使无相应的临床症状和生化指标改变,也应考虑为PBC[3-5]，因此，近些年来，关于AMA-M2用在易感人群，如PBC患者直系亲属[6]及健康人群体检中的研究越来越多，结果表明：AMA-M2的阳性检出率远远高于预期，约为0.36%-0.5%，这提示：PBC的潜在发病率可能并不低，普遍筛查，及早检出是最重要的预防手段[7]。 鉴于此，用于AMA-M2初筛的检测方法也成为一个重要的研究课题。 目前，市场上已有多种检测抗线粒体抗体Ⅱ型的商品试剂盒，如间接免疫荧光法、免疫印迹法、酶联免疫吸附法以及新出现的胶体金免疫层析法等。由于免疫印迹法常采用相关指标组合的方法，导致特异性较低，检测费用高，因而使用率低；本研究选择各临床实验室较常用的间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法，以及新出现的胶体金免疫层析法对抗线粒体抗体Ⅱ型进行研究，通过比较其在确诊PBC患者中的敏感性和特异性，实验室操作方便性，医疗机构普及性等方面，以探究出最适合PBC普筛的检测方法学。 一、对象与方法 1. 对象：PBC组108例，均为来自本院2007年12月至2010年7月间，经住院检查确诊的PBC患 者，诊断标准：2000年美国肝脏病学会（AASLD）推荐的PBC诊断指南：有胆汁淤积的生化改变「主要是指碱性磷酸酶（ALP）、γ2谷氨酰转移酶（GGT）升高」且无其他解释（B超检查胆道系统正常），同时AMA≥1∶40 ，则诊断为PBC；其中女性96例，男性12例，男女比例为1：8，年龄35到72岁；200例正常对照均为本院的健康体检者，100例其他肝病患者和自身免疫病患者100例(系统性红斑狼疮42例，类风湿性关节炎37例，强直性脊柱炎21例，均符合国际诊断标准)为疾病对照组，均为本院住院患者。 2. 检测方法：（1）间接免疫荧光法：试剂盒购自北京欧蒙公司，血清按1：10稀释，如抗AMA抗体阳性，继续血清倍比稀释，测定其最终稀释度，严格按说明书操作（2）酶联免疫吸附法：试剂盒购自上海富莼科芯生物技术股份有限公司，血清按1：50稀释，用四参数回归计算出待测样本浓度值，25RU/ml及以上判定为阳性，严格按说明书操作（3）胶体金免疫层析法：试剂购自上海富莼科芯生物技术股份有限公司，全血离心后直接将血清滴加在金标板上，5分钟后根据T线颜色判读实验结果。 3. 统计学分析：比较采用χ2 检验，用描述性统计方法及统计分析。P < 0.01为差异有统计学意义。 二、研究结果： 1. 三种检测方法学操作步骤主要指标比较如下：
表2 三种检测方法在PBC及疾病对照组中AMA-M2（AMA）的阳性率
三、讨论 原发胆汁性肝硬化作为自身免疫性疾病，一直被划分为自身免疫性肝病的一种，与自身免疫性肝炎，原发硬化性胆管炎相提并论，并被认为是一种罕见病而淡出临床医生，尤其是肝科医生的视线。 然而，随着这一两年来AMA-M2检测的普及力度加大，PBC的新发病例大幅增加，从而提醒我们：PBC可能并非少见病。尤其在病毒性肝炎患者及病毒感染人群的临床研究中发现：伴发PBC的概率较高[8]，因此在肝炎传染科中，此疾病应受到关注与重视。北京佑安医院数据显示：近半数PBC患者伴有乙肝病毒感染，疾病还同时伴发各类型肝炎（甲、乙、丙、戊肝炎，伴发乙型肝炎最常见）。 本院风湿科实验室自2006年12月开展抗线粒体抗体Ⅱ型的检测以来，坚持对全院医生，尤其是肝科与消化科医生进行原发胆汁性肝硬化的临床宣传与推广，结果发现：随着医生对PBC与M2了解的不断深入，M2的检测基数不断增加，阳性检出率逐步上升，被确诊为PBC的患者也逐渐增多。据本院今年1-7月份M2抗体检测数据显示：521例标本中，40例（7.7%）阳性，19例（3.6%）中强阳，21例（4.1%）弱阳性，其中肝病科中强阳11例（占总数57.9%），弱阳7例；风湿科中强阳2例（占总数10.5%），弱阳4例；胃肠道科中强阳1例（5.3%），弱阳2例；血液科中强阳2例（占总数10.5%），弱阳1例；其他内科中强阳3例（15.8%），弱阳7例。 以上数据表明：原发胆汁性肝硬化并非罕见病，而是临床医生，尤其是肝科医生缺乏应有的诊断意识导致PBC的发现率受限，患者易被误诊漏诊，因此，对肝科医生展开PBC与其检测指标AMA-M2的宣传，对PBC展开广泛的AMA-M2筛查是很有必要的，而选择敏感性高，特异性强，简便易操作，易普及的筛查工具就显得弥足轻重。 本研究结果表明：在现有的AMA-M2实验室检测方法中，间接免疫荧光法尽管是最常用的检测方法，但是其检测总抗线粒体抗体，敏感性只有68.3%，特异性为94.5%，较之酶联免疫吸附法的敏感性93.5%，特异性97%和胶体金免疫层析法的敏感性94.5%，特异性96.5%偏低，且酶联免疫吸附法与胶体金免疫层析法符合性极高，这可能与本研究选用的两种试剂盒抗原来源相同有关；从操作方法上来看，AMA-M2间接免疫荧光法需采用荧光显微镜，并需要专业的操作经验方能对结果进行分析和判读，中小医院较难开展，操作时间较长，样本量大时工作量繁重，且难以精确定量；AMA-M2酶联免疫吸附法需采用酶标仪，由于该方法学较成熟，一般免疫室工作人员均能操作，实验结果易判读，操作时间偏长，但适合大样本量操作，可精确定量，对判读中强阳与弱阳有明显优势，但样本量少时，试剂成本偏高，不适合中小医院开展；AMA-M2胶体金免疫层析法无需任何实验室设备与耗材，操作方法简便易学，全程操作只需5分钟，能满足随到随检随取结果的检测要求，适合列为常规检测项目，并可在中小医院广泛开展。 因此，在中国这样一个肝病大国，PBC作为一种并不罕见的肝硬化，其早期诊断，及时治疗便能大大改善预后的特点使得大力加强对PBC的宣传，广泛开展AMA-M2的检测，提高对PBC的诊疗意识非常有意义。而现有的AMA-M2检测方法中，AMA-M2胶体金免疫层析法最为简便快捷，并具有很高的敏感性特异性，是最适合广泛开展，在中小医院普及的检测方法，值得大力推广。 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
