【文献解读】抗磷脂抗体检测的临床应用专家共识解读

导读

前言：由中国医师协会风湿免疫科医师分会自身抗体检测专业委员会牵头组织，北京协和医院风湿免疫科胡朝军，温州医科大学附属温岭医院检验科周仁芳等8位临床和实验室专家依据国内外相关文献，并结合国内实际情况及aPLs检测应用临床经验，分别独立起草共识草案，随后对草案进行讨论汇总形成共识初稿，经召开专家讨论会由所有专家组成员逐条审议讨论，达成一致意见后形成本共识，并发表于中华内科杂志2019年7月第58卷第7期。

目的：本共识从抗磷脂抗体的分类、抗磷脂抗体检测的临床应用、抗磷脂抗体的检测、抗磷脂抗体检测的临床解读等四方面对抗磷脂抗体检测进行了讨论，旨在提高我国临床医务工作者对 aPLs检测的正确解读、检测等方面的认识水平，规范 aPLs检测，为临床提供规范可靠的 aPLs检测结果报告。

抗磷脂抗体（aPLs）是一组以磷脂和/或磷脂结合蛋白为靶抗原的自身抗体总称。aPLs主要存在于抗磷脂综合征（APS）等自身免疫病患者中，是APS最具特征的实验室指标。aPLs 亦是血栓形成和病理妊娠的危险因素。aPLs根据靶抗原的特性主要分为：（1）LA：一组能与负电荷磷脂和磷脂蛋白质复合物相结合的免疫球蛋白，主要基于 LA在体外能延长磷脂依赖的不同途径的凝血试验时间来进行检测；（2）抗负电荷磷脂抗体：aCL抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗磷脂酸抗体、抗磷脂酰肌醇抗体等；（3）抗中性磷脂抗体：抗磷脂酰胆碱抗体等；（4）抗两性磷脂抗体：抗磷脂酰乙醇胺抗体等；（5）抗磷脂结合蛋白抗体：抗β2GPⅠ抗体、抗凝血酶原抗体、抗蛋白C抗体、抗蛋白S抗体、抗膜联蛋白A2抗体、抗膜联蛋白A5抗体等。目前随着新的生物标志物不断被研究发现许多新的 aPLs 已被证实可存在于临床高度疑似的 APS。如在中国 APS患者新的 aPLs研究显示，抗磷脂酰丝氨酸⁃凝血酶原复合物抗（aPS/PT）存在 APS患者，特别是 aCL和抗 β2GPⅠ阴性的 APS患者，与 APS患者的血栓形成密切相关，亦与 LA 存在一定的相关性。抗 β2GPⅠ结构域Ⅰ⁃IgG阳性能增加 APS患者的血栓形成风险，与抗β2GPⅠ⁃IgG 显著相关。因此，这些新的 aPLs 有望成为APS分类标准中的实验室指标。

1. 抗磷脂综合征筛查及诊断：抗磷脂抗体综合（antiphospholipid syndrome，APS）是一种以反复动静脉血栓形成、自发性流产、血小板减少以及持续的血清抗磷脂抗体（aPL）阳性为主要特征的自身免疫性疾病。aPLs 作为 APS 特征性的生物学标志物，已成为 APS分类标准中的实验室指标。根据国际血栓与止血学会（ISTH）2006年修订的 APS分类标准，至少满足 1条临床标准和一条实验室标准方可诊断APS

2.血栓及病理妊娠的风险评估：国外已有研究提示，GAPSS（国际 APS评分）评分系统［包括高血压 1分，高脂血症 3分，LA 4分，aCL⁃IgG/IgM 5 分，抗 β2GPⅠ⁃IgG/IgM 4 分，抗磷脂酰丝氨酸⁃凝血酶原复合物抗体（aPS/PT）3分］能有效预测 SLE和APS 患者血栓再发风险；GAPSS≥10 分为血栓再发高危人群。病理妊娠风险评估：LA、aCL、抗 β2GPⅠ抗体同时阳性（即 3种抗体阳性），既往明确病理妊娠史，以及合并SLE等其他结缔组织病是 APS患者发生病理妊娠的高危因素。

1）LA检测：LA的检测方法包括筛查实验、混合实验、确证实验第14届抗磷脂抗体国际会议上亦提出，LA 的检测程序为筛查试验⁃确证试验，当筛查试验或确证试验阴性时，如临床疑似APS时，需进行混合试验。

a.标本要求：建议使用血清标本，避免热灭活、溶血及脂血标本。

b.aCL 抗体、抗 β2GPⅠ抗体的不同亚型：建议检测aCL⁃IgG 和 aCL⁃IgM 抗体、抗 β2GPⅠ⁃IgG 和抗 β2GPⅠ⁃IgM抗体，若 aCL、抗 β2GPⅠ抗体的 IgG和 IgM亚型阴性，但临床疑似 APS时，建议检测 aCL、抗 β2GPⅠ抗体的IgA亚型。

c.靶抗原：aCL 抗体检测的靶抗原应包括心磷脂和 β2GPⅠ，抗 β2GPⅠ抗体检测的靶抗原应采用包括全部氨基酸序列区域（结构域Ⅰ~Ⅴ）的人源性 β2GPⅠ。

d.检测方法：ELISA作为 aCL、aβ2GPⅠ抗体的常规检测方法，目前在临床上广泛应用。但 ELISA方法存在标准化的缺乏、实验操作的影响因素较多、实验室间检测结果的变异系数大等缺陷。而化学发光法（CLIA）检测 aCL、抗 β2GPⅠ抗体与 ELISA比，具有较高的敏感性和特异性，能实现实验操作简单、快速、自动化、急诊模式进样、定量检测及变异系数小等。化学发光法、荧光酶免疫法、悬浮微阵列技术等自动化、定量检测方法是 aCL、抗 β2GPⅠ抗体今后发展的必然趋势，且会逐渐应用于国内的临床实验室。

e.检测结果单位：aCL⁃IgG、aCL⁃IgM检测单位建议使用GPL、MPL。抗 β2GPⅠ抗体检测结果的国际单位正在进行有效性研究。使用国际单位可促进检测结果在不同实验室、方法学间的一致性和可比性。

定标：建议使用多点定标，定标值与其预计值的相关系数应大于或等于 0.90。

f.精密度：建议免疫学方法检测 aCL、抗 β2GPⅠ抗体的变异系数（CV）应小于或等于 10%，CV 值 20% 是最大可接受值。精密度评估应包括检测范围的多个水平值（包括临界值）。对厂家提供的检测试剂，应在说明书中明确预期达到的精密度。

g.室内质控：每批次检测时，建议使用阴性和阳性质控物进行质控，推荐使用外部质控物，阳性质控至少要包括检测值接近临界（cut off）值的质控物。若阴性或阳性质控物的检测结果超过既定的检测范围，如阴性质控检测为阳性，或阳性质控检测为阴性，则应拒绝该批次实验。

h.参考值：（1）定性检测：建议使用非参数的百分位数方法建立临界（cut off）值，推荐采用 99的百分位数（99%），大于临界（cut off）值判断为阳性；（2）定量检测：可参照CLSI EP28⁃a3c的要求，募集至少 120例表观健康人群的血浆标本建立参考区间，临床实验室可采用 20~60例表观健康人群验证该参考区间。

i.检测结果报告：建议 aCL、抗 β2GPⅠ抗体的检测结果报告中应包括检测方法、检测结果及单位。aCL、抗 β2GPⅠ抗体的中高滴度检测结果通常为 99的百分位数（99%）的 2倍以上。

1、aPLs阳性不仅是 APS的诊断标准之一，，aPLs阳性亦可出现在 SLE等自身免疫病、恶性肿瘤（如淋巴瘤、白血病、肺癌等）、感染性疾病（如梅毒、结核、传染性单核细胞增多症等）、某些药物（如普鲁卡因酰胺、氯丙嗪、避孕药等）使用后及部分健康人群中。

2、接受华法林、肝素及新型口服抗凝剂治疗的患者可能出现 LA假阳性，因此对接受抗凝剂治疗患者的 LA检测结果，应谨慎解读。

4、aPLs低滴度阳性可见于生理性、暂时性、感染或病理状态。

5、新型 aPLs检测项目：虽然 LA、aCL⁃IgG、aCL⁃IgM、抗 β2GPⅠ⁃IgG、抗 β2GPⅠ⁃IgM 抗体检测是 APS 分类标准中的实验室指标，但其他新型 APLs 检测项目（如 aPS / PT、aCL⁃IgA、抗 β2GPⅠ⁃IgA、抗 β2GPⅠ结构域Ⅰ抗体等）的相关临床意义，仍有待在长期、前瞻性的研究及临床实践中深入探讨。