抗体片段化,就是用工具(蛋白酶及化学物质)将抗体分子切成特定大小的片段。因为在实际运用时,抗体分子真的太大了!抗体分子的分子量一般为几百道尔顿(例如IgM五聚体就更庞大了),分子直径在10 nm~15 nm之间,而制备成抗体片段后,就呈现出各自的优势。 各类型抗体及抗体片段的分子量 抗体片段化后,因去掉了某些功能结构域以及分子量的改变,具有与全长抗体不同的特性: IgG、IgM各结构域功能及各片段的特性 IgG的片段化 木瓜蛋白酶 胃蛋白酶Pepsin 无花果蛋白酶 IgM片段化 不同种属的IgM片段化产物是有差异的,如鼠和人IgM在单体的连接方式上的不同导致二硫键位置的不同使得产物有差异,另外不同物种IgM上寡聚糖修饰的差异也会影响酶的切割,所以不同种属的IgM进行片段化需要不同的条件,没有一套通用的方案。
胰蛋白酶Trypsin:丝氨酸蛋白酶,最适反应pH8.0。可将IgM切割成F(ab')2、Fab、IgG型和Fc5片段。 化学试剂:2-MEA可将IgM处理成"IgG"型片段或/和还原型IgG ("rIgG" 片段。对小鼠IgM控制还原条件可以产生反转的"IgG"型片段。 |
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