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中盛溯源推出 hiPSC-Luc-GFP 细胞株

 生物_医药_科研 2019-07-16

hiPSC-Luc-GFP细胞株

Rosa26位点是常用的基因敲入位点;敲入该位点的基因表达活性高,对旁侧基因影响较小。利用CRISPR基因编辑技术,可将外源的基因片段定点插入到Rosa26位点,实现外源基因的稳定高表达。 


Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株是由中盛溯源商品化hiPSC细胞株(RC01001-A)制得,利用CRISPR基因编辑技术,将Luc和GFP等基因片段定点插入到Rosa26位点,细胞可以高效的表达Luciferase和GFP,可在Nuwacell™ 科研级hPSC培养体系中可以长期稳定快速增殖,具有与人类胚胎干细胞(hESC)高度类似的克隆形态和基因表达,长期维持正常核型,并在体外(in vitro)和体内(in vivo)都具有完备的三胚层分化潜能。适合科研用途的干细胞研究和应用。

Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP的优势

  • 稳定性高,后代表达一致

  • 能实现A基因在Rosa26位点及B基因在H11位点同时过表达

  • 外源基因表达不受旁侧基因影响,最大程度减少了对内源性基因的影响

  • 结合Cre-loxp系统,还可以构建条件(诱导)性过表达的小鼠模型



细胞敲入基因信息

Nuwacell™ 科研级hiPSC-Luc-GFP细胞株Rosa 26 位点敲入基因信息示意图。

细胞形态与生长情况

连续培养的Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)细胞形态图示。荧光倒置显微镜图示。图A、B为正常传代DAY 2细胞图示,C、D为正常传代DAY 3细胞图示。标尺:100μm。


细胞GFP阳性率检测


连续培养的Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)GFP阳性率检测,GFP表达阳性。上图为流式细胞分析结果,浅灰色线条为hiPSC阴性对照;黑线为hiPSC-Luc-GFP细胞株的GFP阳性率结果。 

细胞荧光素酶活性检测

Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)荧光素酶(Luciferase)活性检测结果。上图为RLU(相对荧光强度)分析结果,其中阴性对照为普通hiPSC,hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)的荧光素酶(Luciferase)报告基因表达阳性。

细胞表面标志物检测

Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)细胞表面标志物检测结果。上图为流式细胞分析结果,其中浅灰色线条为同种抗体阴性对照,黑线为hiPSC细胞表面标志物抗体。

细胞多能基因检测

Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)细胞多能基因检测结果。上图为qRT-PCR分析结果,POU5F1与NANOG为细胞多能基因。

细胞染色体核型检测

Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)细胞核型检测结果:46,XY。结果解释:G显带,计数20个分裂相,核型分析5个,未发现染色体数目或结构异常。

细胞分化潜能检测

Nuwacell™ hiPSC-Luc-GFP细胞株(P30)细胞在免疫缺陷小鼠体内形成畸胎瘤。标尺:100μmE、F、G分别为神经组织(外胚层)、软骨组织(中胚层)、肠上皮组织(内胚层),成瘤时间8周。

附:中盛溯源公司简介

中盛溯源生物科技有限公司由全球著名科学家、人类诱导多能干细胞(hiPSC)发明者之一俞君英博士领衔创建,并于2016年获得A轮投资1.5亿元人民币。中盛溯源专注于人诱导多能干细胞与人体各种功能细胞的科研与转化,致力于提供高质量的干细胞产品与技术解决方案。

中盛溯源研发团队至今发表SCI学术论文39篇(总引用超过21000次)、著作章节6部,获得8个美国专利和3个待审专利。

中盛溯源研发中心拥有B+A(百级)级别细胞间5间/1000平米,C+A(万级)级别细胞间6间/1000平米,分子生物学实验室350平米,SPF级试验动物房220平米。可承接分子生物学(基因、蛋白质工程等)、细胞生物学(功能细胞定向分化、微器官制备、细胞生物学分析与检测等)、试验动物学(疾病动物模型、病理研究等)、和生物信息学(全基因组测序、表观遗传分析等)方向的科研与转化研究。

截止至2018年12月,中盛溯源已经与国内110余家一流科研单位、临床医院、生物企业等建立业务与项目合作。

中盛溯源将为您提供优质的试剂、细胞与服务。我们期待与您携手共行,共同致力于中国干细胞科研与临床转化。

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