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北京协和分枝杆菌感染多学科协作沙龙（一） 纪实之三 结核分枝杆菌实验室诊断 技术进展—— 结核分枝杆菌及利福平耐药基因检测(Xpert) 传统的结核分枝杆菌检测方法众多，包括结核菌素试验、涂片镜检、分枝杆菌培养、组织病理等，但受限于假阳性和假阴性高、灵敏度低、检测时间过长、无耐药结果、操作繁琐、实验室要求高及生物安全要求高等缺点，临床需求得不到真正满足。 Xpert MTB/RIF以实时荧光PCR为原理，针对结核分枝杆菌复合群特有的利福平耐药基因（rpoB基因）核心区间设计引物和probeA、probeB、probeC、probeD、probeE探针，检测其是否发生突变，进而用于诊断是否为结核及是否对利福平耐药（即rpoB序列存在突变）。检测结果及解释如下： 1. 所有探针阴性：结核分枝杆菌复合群阴性； 2. 所有探针阳性：表示无突变，未导致利福平耐药，即结核分枝杆菌复合群阳性，利福平敏感； 3. 一条或两条探针阴性，其余探针阳性：结核分枝杆菌复合群阳性，一条或两条探针阴性表示利福平耐药基因核心区域发生突变，利福平耐药； 该技术是美国Cepheid公司开发的一种基于GeneXpert平台，核酸提取、扩增及检测一体化的快速检测试剂盒，操作简便、即时检测、且快速，只需110分钟，样本裂解、核酸提取、PCR体系配制、扩增和检测步骤全部在密封体系中完成。是一种具有高灵敏度和高特异性的检测手段，其灵敏度和特异性分别高达89%和99%。因此，是一项在全球获得广泛认可的结核快速诊断技术，世界卫生组织（WHO）自2010年起就推荐其作为活动性结核病及利福平耐药的快速诊断方法，尤其是对结核高负担国家应作为结核快速检测及耐多药结核（MDR-TB）快速筛查的首选检测方法进行使用。 2018-05-01正式实施的《中华人民共和国卫生行业标准肺结核诊断》指出：肺结核确诊病例由具有细菌学阳性结果，改为具有病原学阳性结果（包括：细菌学及分子生物学检查结果）或病理学阳性结果。根据新版诊断标准，临床在诊断疑似肺结核患者时，对患者做影像学检查，同时送检痰、支气管吸取物、支气管灌洗液、胸膜活检组织或胸水标本做Xpert MTB/RIF快速检测。影像学支持结核同时XpertMTB/RIF检测阳性，当天即可确诊肺结核（包括气管、支气管结核以及结核性胸膜炎）。 XpertMTB/RIF也是被WHO推荐的应用于肺外结核的诊断技术，在结核性脑膜炎、淋巴结结核、泌尿系统结核及骨结核等方面应用。 本期嘉宾：孙宏莉  副研究员，硕士研究生导师，北京协和医学院“临床检验诊断学系”临床微生物检验教研室组长，检验科临床微生物及免疫组副组长。 主要学术兼职：中华医学会微生物及免疫学分会委员，中华预防医学会医院感染控制分会青年委员，欧洲临床微生物和感染病学会药敏委员会华人抗菌药物敏感试验委员会（ChiCAST）委员及秘书，中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会委员，北京中西医结合学会检验医学专业委员会常务委员，北京微生物学会理事 ，北京医学检验学会第一届微生物与感染分会委员。 主要研究方向：临床病原菌的实验室检测及其所致感染的实验室诊断、临床常见病原菌的耐药监测研究、肠球菌及葡萄球菌耐药机制及其分子流行病学的研究、医院感染爆发事件的病原学检测分析及及其分子流行病学分析、综合医院分枝杆菌的实验室检测及其流行病学分析。 |
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