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医学联络官 Medical Liaison officer Club 重组DNA技术 是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。限制性核酸内切酶可以把DNA切成长度不同的片段，是重组DNA中重要的工具酶。 （三）目的基因 应用DNA重组技术的目的：分离、获取某一感兴趣的基因或DNA序列；获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因。即纯化的特定基因（靶基因）。 基因载体：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达的有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 在重组DNA中常用的载体包括质粒DNA、噬菌体DNA、柯斯质粒载体（粘粒）、病毒DNA和人工染色体等类型。 基因工程基本原理 （一）目的基因的获取 目的基因主要有以下几种来源： 1.cDNA文库 以mRNA做模板通过反转录的方式获得的DNA。 2.基因组DNA文库 用限制性内切酶切割组织或细胞染色体，得到所需DNA基因片断。 3.聚合酶链式反应（PCR）用体外快速扩增方法得到所需目的基因。 4.化学合成法 已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列用DNA合成仪合成。 （二）克隆载体的选择 克隆载体的选择的标准： ①能自主复制；②具有两个以上的遗传标记物便于重组体的筛选和鉴定；③有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点；④分子量小，以容纳较大的外源DNA。 （三）外源基因与载体的连接 目的基因与载体DNA片段连接成一个完整的重组体分子。 1.粘性末端连接。 2.平端连接。限制性内切酶切割产生的平端、粘端补齐或切平形成的平端。 4.人工接头连接。由平端加上新的酶切位点，再用限制酶切除产生粘性末端，而进行粘端连接。 外源重组DNA导入宿主细胞后，首要任务是要筛选含有目的基因的转化菌并加以扩增。 抗药性标记选择是筛选重组体最常用的方法。 免疫学方法特异性强、灵敏度高，尤其适宜于筛选无任何选择标志的基因。 重组DNA技术操作过程可形象归纳为： 分—分离目的基因 切—限制酶切目的基因与载体 接—拼接重组体 转—转入受体菌 筛—筛选重组体 早期是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。 目前广义上来讲是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法。 一、疾病基因的发现 二、发展新药物 三、DNA诊断（基因诊断） 四、基因治疗 五、遗传病的防治 |
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