 摘要 虽然胃癌患者的预后有良好的进展，但仍有一些患者具有不寻常的局部和全身复发模式。因此，需要更好地了解疾病的早期分子事件。目前的证据表明，长非编码RNA(lncRNAs)可能是参与人类胃癌发生发展的一类重要的功能调节因子。我们先前的研究表明HOTAIR与胃癌的发生有关，HOTAIR的过度表达预示着不良的预后。在本研究中，我们研究了胃癌中lncRNA FEZF1-AS1的特征。 研究结果  图1 图1 FEZF1-AS1在人胃癌组织中的表达水平。 A，B：GEO数据库中FEZF1-AS1的相对表达水平。 C：肿瘤组织中FEZF1-AS1的相对表达与邻近正常组织相比(n=82)。用qRT-PCR检测FEZF1-AS1的表达，并归一化为GAPDH的表达。 D：基于FEZF1-AS1表达预测胃癌的D-ROC曲线，以相应的邻近正常组织为对照。*P<0.05  图2 图2 FEZF1-AS1上调与胃癌患者的肿瘤大小、分期和不良生存率相关。 A：FEZF1-AS1表达分为两组。最终结果呈现为肿瘤组织相对于正常组织的折叠变化。折叠变化大于或等于2.0表示高表达，小于2.0表示低表达。 B，C：FEZF1-AS1表达与肿瘤大小和分期相关。 D：根据FEZF1-AS1表达水平绘制Kaplan-Meier无病生存曲线。 E：基于FEZF1-AS1表达的ROC分析用于胃癌患者的生存预测。*P<0.05，*P<0.01  图3 图3：FEZF1-AS1在体外和体内促进胃癌细胞增殖。 (A)MTT法检测转染si-FEZF1-AS1和pCDNA-FEZF1-AS1的AGS，SGC-7901和MGC-803细胞的细胞活力。数值代表三个独立实验的平均值±SD。 (B)进行集落形成试验，以确定si-FEZF1-AS1和pCDNA-FEZF1-AS1转染的AGS，SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况。数值代表三个独立实验的平均值±SD。 (C)FEZF1-AS1下调表达对异种移植小鼠模型中肿瘤生长的影响。将空载体或sh-FEZF1-AS1转染SGC-7901细胞，接种于裸鼠体内(n=7)，第16天获得肿瘤并称重。*P<0.05和*P<0.01。 (D)肿瘤切片用抗Ki-67抗体进行H&E染色和IHC染色。  图4 图4：FEZF1-AS1通过诱导G1-S和减少胃癌细胞凋亡来促进胃癌细胞的增殖。 A，B和C条形图表示G0/G1，S或G2/M期的AGS，SGC-7901和MGC-803细胞的百分比，如图所示。 D，E，F流式细胞仪检测细胞凋亡率。LR，早期凋亡细胞；UR，终末凋亡细胞。数值代表来自三个独立实验的平均值±SD*P<0.05，*P<0.01(g，h和i)用si-FEZF1-AS1或pcDNA-FEZF1-AS1对AGS，SGC-7901和MGC-803细胞中的CDK2，CDK4，CDK6和CyclinD1进行Western blot分析。GAPDH蛋白作为内对照。  图5 图5：FEZF1-AS1下调P21表达驱动细胞周期。 用A，B和C QRT-PCR检测si-FEZF1-AS1或pcDNA-FEZF1-AS1对AGS，SGC-7901和MGC-803细胞的mRNA表达。数值代表来自三个独立实验的平均值±SD*P<0.05，*P<0.01。 用si-FEZF1-AS1或pcDNA-FEZF1-AS1对AGS，SGC-7901和MGC-803细胞中P21的d，e和f蛋白印迹分析。GAPDH蛋白作为内对照  图6 图6：转录因子SP1参与FEZF1-AS1的上调。 A：qRT-PCR检测FEZF1-AS1在AGS和SGC-7901中的表达。 B：qRT-PCR检测FEZF1-AS1在AGS和293T中pcDNA-SP1的表达。 C：芯片分析用于显示SP1与内源性FEZF1-AS1启动子区域的直接结合。条形图：SD；*P<0.01  图7 图7：概要示意图描述了FEZF1-AS1调节GC细胞增殖：(I)SP1加速胃癌中FEZF1-AS1的过度表达；(Ii)FEZF1-AS1抑制P21的转录，导致G1-S停滞有助于增殖；(Iii)FEZF1-AS1募集并结合LSD1去甲基化H3K4me2在p21启动子调控P21在胃癌中的表达。 结论 综上所述，这些数据表明FEZF1-AS1可部分通过抑制P21的表达而作为胃癌的“癌基因”；FEZF1-AS1可作为胃癌患者新治疗的候选预后生物标记物和靶点。 DOI：10.1186/s12943-017-0588-9 参考文献 [1].Siegel R, Ma J, Zou Z, Jemal A. Cancer statistics, 2014. CA Cancer J Clin. 2014;64(1):9–29. [2].Orimo T, Nakano S, Inagaki M, Akabane H, Yanagida N, Shibaki T, Shomura H, Kudo T, Shonaka T, Oikawa F, Aiyama T. A case of AFP-producing gastric cancer patient with liver relapse occurred three months after endoscopic mucosal resection (EMR) and gastrectomy. Gan To Kagaku Ryoho. 2011;38(12):2328–30. [3].Hanahan D, Weinberg RA. Hallmarks of Cancer: The next generation. Cell. 2011;144(5):646–74. [4].Beaver JA, Amiri-Kordestani L, Charlab R, Chen W, Palmby T, Tilley A, Fourie ZJ, Yu J, Liu Q, Zhao L, Crich J, Chen XH, Hughes M, Bloomquist E, Tang S and Sridhara R, et al. FDA Approval: Palbociclib for the Treatment of Postmenopausal Patients with Estrogen Receptor-Positive, HER2-Negative Metastatic Breast Cancer. Clin Cancer Res. 2015;21(21):4760-6. END |
|
|
