从微量细胞中提取基因组DNA

介绍

BIOG Microdose Cell DNA Mag-B Kit是我公司研发的专门用于从微量细胞、组织样本中提取DNA的试剂盒。在有些试验中，样本的获得很不容易，样本量很少，用一般的试剂盒很难获得理想的DNA。BIOG Microdose 采用独特的消化液消化组织、细胞中的蛋白质，使样本DNA的释放更加充分。试剂盒采用了最新的离子膜技术并反复优化了裂解液和洗脱液配方，使样本中的微量核酸能够被充分地提取出来。与一般的核酸提取试剂盒相比，BIOG Microdose 在微量组织或细胞样本中的DNA提取得率显著较高，纯度较好，可以直接应用于PCR、荧光定量PCR、分子杂交和一些酶切试验等。 

特点

◎采用最新的离子膜技术和独特的裂解液配方，DNA提取得率高，特别适用于微量组织或细胞样本的DNA提取；

◎操作简便快速，可在20分钟内完成提取过程；

◎提取DNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.7-1.9。

操作步骤：

1.  请自行准备：无水乙醇、生理盐水及1.5mL离心管。

2.  取出洗涤液，按70%比例加入无水乙醇， 9mL加入21mL无水乙醇，18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

3.  样本处理：

    3.1 微量组织：a)活检、冰冻组织，先用液氮研磨为粉末，转入1.5mL 离心管内，加入100 μL 生理盐水，混匀，进入步骤4；

    b)穿刺组织，体积小于50μL，加入50 μL 生理盐水，转入1.5mL 离心管内，混匀，进入步骤4；50-100 μL穿刺液，混匀，直接进入步

    骤4；大于100 μL，2000rpm离心5分钟，吸弃部分上清，留下100 μL上清，振荡混匀，进入步骤4。

    3.2 微量细胞：a）胸腹水、尿液、脑脊液等，2000rpm离心5分钟，吸弃部分上清，留下100 μL上清，振荡混匀，进入步骤4。

    b) 培养细胞，先制备成细胞悬液，转入1.5ml离心管，2,000 rpm 离心 5分钟，弃部分上清，留100μL 上清，混匀，进入步骤4。

4.  加入200μL裂解液，20μL消化液，4μLcarrier，振荡混匀，56℃温育10 分钟至细胞完全裂解。

5.  加入350 μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。

6.  将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

7.  将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

8.  将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，离去残留的洗涤液。

9.  取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入30-50 μL 洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm  4℃ 离心1分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。