磁珠法提取的优点 1.生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应,能够用高效DNA提取,满足微量生物样本DNA提取的要求。 2.磁珠表面能够进行化学修饰,从而与DNA进行特异性吸附,去除样品DNA溶液中的抑制物质,如:有机溶剂、去污剂、金属离子、燃料等。 3.生物磁珠表面功能团数量可以控制获得可提取DNA溶液的浓度信息,实现定量的要求。 4.生物磁珠可以通过特殊的合成工艺使其具有超顺磁特性,因此,能够通过仪器进行自动化操作,满足数据库建设对大批量样本提取的需要,减少人为因素。 5.用时少,操作简单,是用于大多数生物检材。 6.低廉,便于广泛应用。由于纳米生物磁珠合成采用的都是低价无机和有机原料。无须特殊的仪器设备,使得最终的合成和研发成本都很便宜,适合于我国的基本国情和经济现状。 7.适应了建立DNA数据库所需的大量生物样本的提取,为我国DNA数据库的建设铺平了道路,打下了基础。 与传统提取DNA法相比速度更快!纯度更高!一般情况下不需离心操作,单一样品多应在1h内提取完毕。对全血、骨骼、植物等提取DNA在不pcr扩增的情况下能在凝胶电泳中看到较为明亮的条带。 特点 ◎BIOG Tissue DNA Mag-B Kit操作简便快速,可在30分钟内获得理想的DNA,适用于一次处理较多样本的批量提取; ◎提取DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.7-1.9; ◎采用自主研发的改性硅基磁珠,同样的样本量提取的DNA更多。 实验步骤 ![]() 请自行准备:无水乙醇、异丙醇、1.5mL离心管,生理盐水。 ↓ 取出洗涤液,按70%比例加入无水乙醇,如6mL加入14 mL无水乙醇,12mL加入28 mL无水乙醇,混匀。 ↓ 取10-20mg左右的组织,用液氮研磨为粉末,转入1.5mL 离心管内,加入100 μL 生理盐水,振荡15秒 (或直接在100 μL 生理盐水中将组织匀浆为细胞悬液),加入200 μL 裂解液, 20 μL 复合消化液,充分混匀,56℃温育12分钟(如组织匀浆不充分,可适当延长消化时间至组织完全消化)。 ↓ 冷却到室温,加入300μL异丙醇,充分混匀,再加入20μL磁珠复合液(每次使用前须充分混匀),振荡混匀3min(注意不要颠倒混匀,以防磁珠粘附于管盖内壁),静置2min。 ↓ 将离心管置于磁力架上放置约20s至磁珠完全吸附,开盖,彻底吸弃上清液(注意枪头不要接触磁珠)。 ↓ 加入800μL配制后的洗涤液,将离心管从磁力架上取下,充分振荡2min,确保磁珠完全分散。将离心管置于磁力架上放置约20s至磁珠完全吸附,开盖,彻底吸弃上清液(注意枪头不要接触磁珠)。 ↓ 将离心管从磁力架上取下,开盖,干燥约3-5min,至无明显乙醇气味。 ↓ 加入50-100 μL洗脱液,振荡至磁珠充分散开,室温静置2min,再振荡混匀1min。 ↓ 将离心管置于磁力架上,待磁珠完全吸附后,小心吸取上清液至一新的1.5mL离心管中,提取的核酸可直接用于下游实验,或-20℃保存备用 |
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