水产动物药物学系列(42)

主要微生态制剂

乳酸菌类

乳酸菌可以分解糖类产生乳酸，无芽孢，革兰阳性， 厌氧或者兼性厌氧生长，稳定性较低，耐酸，在pH3.0～4.5时仍可生长，适应于胃肠的酸性环境。乳酸菌在饲料添加剂中具有重要的地位。在美国FAD公布的42种微生物中有近30%是乳酸菌。乳酸菌是鱼肠道中的正常菌群，能在鱼肠道系统中定植，阻止和抑制有害物质，增强抗感染能力。乳酸杆菌能合成动物体所需要的多种维生素，如维生素B1、B2、B6、B12、烟酸、泛酸、叶酸等。在动物体内通过生物拮抗降低pH， 阻止和抑制致病菌的侵入和定植，维持肠道生态平衡；降解亚硝胺、氨、粪臭素等有害物质；活菌体和其代谢产物中含有较高的超氧化物歧化酶（S0D），能消除氧自由基的不利作用，增强体液免疫和细胞免疫，增强机体调节活性，促进生长；但该菌在生长过程中不形成芽孢，抗逆性差，易失活难保藏，所以在饲料中的应用受到一定的限制。目前，有些市场售产品采用微胶囊技术提高了其对环境的抗逆性，但成本也相应提高。

乳酸菌是鱼肠道内的正常菌群，它的数量与营养、环境因素有关，如不饱和脂肪酸摄入量、盐分、氧化铬、紧张程度等均会影响鱼肠道内乳酸菌的量， 饲料种类和季节也会影响鱼肠道内乳酸菌的量。乳酸菌在鱼体肠道系统定植， 可以抵抗革兰阴性致病菌，增强抗感染能力，增加机体肠粘膜的免疫调节活性， 促进生长。Gildberg等用含有乳酸菌饲料喂鳕鱼苗，3个月后将鱼苗放养在带有强致病弧菌的环境中，能够提高抗病率。用乳酸链球菌和保加利亚乳杆菌饲喂轮虫和卤虫作为大菱鲆幼苗的饲料，可使轮虫和卤虫的存活率较对照组有显著提高。

嗜酸乳杆菌

【种属名称】乳杆菌属嗜酸乳杆菌种

【来源】最初从幼儿的粪便中分离，也可分离自青年和成人的口腔和阴道、火鸡和小鸡的肠道、小鼠的口腔和阴道。常用菌种有ATCC11506、ATCC11749、 ATCC13650， ATCC13651和ATCC13652等。

【菌种特征】杆菌，两端圆，通常为（0.6-0.9）μm×（1.5-6.0）μm。呈单个、成双或短链出现。不运动，无鞭毛。菌落通常粗糙，用显微镜观察，一般显示缠绕或绒毛丝状物，从暗影的菌堆的中心放射伸出。深层菌落呈发射或分枝形的不规则形状。无特定的色素。革兰阳性。生长最适温度为35～38℃，最低温度15℃，最适pH5.5-6.0。兼性厌氧，接触酶阴性。无鞭毛，不运动。细胞壁通常缺乏磷壁酸，在某些菌株中测出少量的甘油磷壁酸，细胞中不含有任何可鉴别的己糖和戊糖。精氨酸不产氨，牛奶产酸和凝固特性是可变的，可产0.3%-1.9%乳酸。乳酸相对构型为DL型，菌体DNA的G＋C含量为36.7±0.7m0l%。

【有效成分】活性嗜酸乳杆菌。

【功用】嗜酸乳杆菌在生长中可以产生一些抑菌物质，如有机酸。细菌素及类细菌素，可以抑制肠道中有害微生物生长繁殖（如致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌），能杀死许多有害细菌，如白色念珠菌、大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯肺炎球菌、痢疾志贺菌、金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌、产气荚膜梭菌等，起到平衡肠道菌群的作用。并能产生B族维生素，包括叶酸、生物素、维生素B6和维生素K等，分泌各种有益物质，如乳酸、乙酸，降低肠道pH 。

【鉴别和检测方法】参照《工业微生物实验技术手册》和《伯杰细菌鉴定手册》提供的方法执行。

（1）鉴别方法根据细菌的生化特征进行鉴别。

（2）检测方法摘要 MRS 培养基组成如下：

调整pH至6.2～6.4之间，121℃灭菌15～20min 。

将经过2次活化的菌种接种于pH分别调至1.5、2.5、3.5、4.5及胆汁盐分别调至0.1%、0.2%、0.3%、0.4%的MRS培养基中，37℃培养。每隔一定时间采用无菌生理水以10倍递减依次稀释进行平板菌落计数。

【使用方法】添加于饲料或饮水中使用。在饲料中添加量一般为1×10000000cfu/kg。

【注意事项】一般不与抗生素合用，否则会降低应用效果，甚至诱导嗜酸乳杆菌产生耐药性。

【规格】一般含活菌量1×100000000cfu/g（ml）。

【储存方法】密闭储存于阴凉、通风、干燥处。

酵母菌类

酵母菌是喜偏酸环境的需氧菌，不耐热，60～70℃1h即死亡，可在肠道内大量繁殖，在水产养殖中可以使用。从鱼体和水体分离到的酵母主要有假丝酵母属、红酵母属、隐球酵母属等。酵母菌富有动物所必需的多种营养成分，是维生素和蛋白质的来源，可提供丰富的蛋白质、核酸、维生素和多种酶，具有增加饲料适口性，促进动物对饲料的消化吸收能力，改善肠道生态环境，提高动物对磷的利用率等功能，并能促进机体免疫功能，增强抗病力，还可降低黄曲霉的毒性。酵母细胞壁的主要成分是甘露聚糖和葡聚糖，研究表明甘露聚糖可增强吞噬细胞活性。

Uma等的实验表明，酿酒酵母7764可以抑制鲑气单胞菌的生长。酵母菌与乳酸菌共用，可提高印度对虾幼苗的生长率、存活率。用一种法式红色酵母作为虾青素的来源增加大麻哈鱼肉的色泽，比用人工合成虾青素的效果还要好。王华等指出，酵母在饲料中的添加量不应超过10%，太高易导致鱼体酶系的紊乱，并能使人体尿酸、核酸超标。

啤酒酵母菌

【种属名称】酿酒酵母属啤酒酵母种

【来源】最初来源于水果、果汁和作物的果实中，但是商业用酵母菌与野生种有很大不同，是多年来工业微生物学家已通过自己的筛选和基因操作技术对它们进行了大幅度的改造。有的来源于多种动物、人或昆虫。常见菌种有CGMCC2.605、CGMCC2.606、CGMCC2.607、CGMCC2.1422等多株。

【菌种特征】细胞呈圆形、卵圆形或洋梨形。在幼年菌落中，细胞为（4～14）µm×（3～7）µm， 长和宽的比例是1～2：1。在麦芽汁中，沉淀表面形成环状膜。子囊孢子圆形、平滑。能利用葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖发酵，部分利用棉子糖发酵。不能利用硝酸盐。

【有效成分】活啤酒酵母。

【功用】改善胃肠内的菌群比例，促进有益菌的生长与繁殖，排斥病原菌在肠粘膜表面的吸附定植，防止毒素和废物的吸收。酵母细胞壁富含蛋白质和B族维生素，可作直接营养，提供动物多种营养成分，且富含甘露寡糖。因此，增加胃肠对铁、锌、镁、钙等元素的吸收利用，提高饲料利用率，可以增加动物的免疫力，提高动物血液免疫球蛋白水平。

【鉴别和检测方法】参照《真菌鉴定手册》、《酵母菌的特征与鉴定手册》和《新编食品微生物学》提供的方法执行。

（1）鉴别方法根据菌株生化特征进行鉴别。

（2） 检测方法摘要 取产品适量，用无菌水逐级稀释，接种在麦芽汁培养基中，25～28℃下培养48～72h，进行活菌计数，计算产品活菌含量。

麦芽汁培养基的制备：1kg大麦芽粉与2.6L水混合，在45℃下进行搅拌保持3h，然后温度升到63℃保持1h。过滤后，120℃高压蒸气灭菌15min，再过滤并加水稀释到相对密度为1.06，pH调整到约5.4。对于麦芽汁琼脂，将麦芽汁相对密度调至1.04，加入2%琼脂（w/v）， 该培养基在110℃高压蒸气灭菌15min。

【使用方法】添加于饲料或饮水中使用。制作青贮饲料或饲料中添加时，用量一般为1×100000000cfu/kg。

【注意事项】一般不与抗真菌类药物合用，否则会影响效果。可与非抑菌或非杀真菌类饲料药物添加剂混合使用。

【规格】一般含活菌量1×100000000cfu/g（ml）。

【储存方法】密闭储存于阴凉、通风、干燥处。