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动物细胞培养的培养基

 中科博生 2020-05-09

具研究表明,动物细胞培养的培养基分为天然培养基和合成培养基两大类。

天然培养基营养成分高,比较适于细胞培养,但成分复杂,来源有限。动物血清是细胞培养中用量最大的天然成分.含有丰寓的营养物质,能促进细胞的生长繁殖,同时对细胞的貼壁和保护右明显作用.合成培芥基模拟天然培养基的成分,其中的组成物质成分明确,补充部分天然培养基后(通常星血清)能使细胞很好地生长和繁殖。合成培芥基可根据实验目的,调节各种成分的比例,设计出许多种培养基。

由于血清的成分复杂,成本较高,而且给培养过程的后续处理工作増加了困难,因此,一些适用于各种细胞生长的无血清培养基相继岀现。血清是由多种成分组成的很不明确的混合物,这往往干扰研究某一物质对细胞作用机制的实验工作。血清是由血浆除去纤维蛋白而形成的,血清促进细胞的生长和繁殖,但有时也可能抑制某些细胞的生长促进分化.目前还不清楚血清中哪些成分是细胞生长所必需的。

因此使用血清需注意以下几点:

第一,血清是血液凝固过程中形成的,包含凝集过程中释放的各种因子,而这些因子在血浆中是不存在的。因此,血清对于某些种类细胞的生悦更为有利,如促进成纤维细胞生长而抑制表皮细胞生长。

第二,潜在的血清细胞毒作用经常被忽略。各种血清不同批次之间有差异,成分不能保持一致,因此血清需要筛选。

第三,血清有时所含的细胞特异生长因子水平不足,需要补充,而加入过多对细胞又有抑制作用。

实验室细胞培养工作中,为了达到一定的实验目的常需精确控制试验条件,希望避免使用每一批成分不明确的血清而发生培养条件的改变。无血清大规模細胞培养有两个优点,一是可避免加入必须由用其他方法才能除去的外来蛋白质。第二,无血清细胞培养一般是由基础培养基和替代血清的补充因子组成的。基础培养基是各种营养物质的混合物,包括细胞生长、发育、遗传、繁殖所必需的物质。

基础培养基的成分明确,并且可以根据细胞的不同的营养要求増加或减少某些成分。用这些培养基培养细胞时必须添加一定量的血清,细胞才能生长繁殖.血清中含有一些细胞生长所必需的生长因子、激素、脂类、多种蛋白和微量元素等。血清是一个非常复杂的蛋白质和生物大分子和小分子的混合物,这些复杂的成分给培养产物的分离、检测带来许多困难。无血清培养基是细胞培养研究中的重大进展。无血清培养基完全由已知成分组成,这为研究和阐明细胞生长、増殖和分化机制等冋题提供了有力的工具,同时更方便了应用于生物工程产品的规模化生产和下游的纯化工作。

无血清培养基根据其成分分为3类,第一类的化学成分完全明确,含有低相对分子质量成分和微量元素,这类培养基比较便宜,但仅适用于一些确定的细胞系;第二类与第一类的不同在于含有一些纯化的蛋白质、激素和脂类,培养基中加了一些不确定成分,大多数无血清培养基属于此类,第三类培养基以价格便宜和使用简单为目的,而不是化学确定性,适用于大规模工业化生产使用。

使用无血清培养有很多好处,如改善细胞培养的車复性、避免不同批次血清质量的变化、在不同的实验室培养液处方能标准化、降低成本(特别考虑FCS).比较容易提纯培养产物、在生物分析中减少非目的蛋白质的干扰,以及避免血清的细胞毒作用等。

无血清培养基也有缺点,如无血清培养基有时需要补充激索和生长因子,这大大增加了成本3不同的细胞类型需要不同组成的无血清培养基才适合它的生长;无血清培养基对物理化学改变的耐受力较差.以及在无血清培养基中,细胞生长较慢,饱和密度低。

各种化学明确培养液都是来自Eagle的最小基本培养液(MEM),包括Dulbec-co的培养液。无血清培养液的配方,通常是DME和F12的E( V/V)混合液,已经证明将F12较丰富的物质(微量元素、多种维生素)与较高营养浓度的DME相结合,可用于造血细胞及杂交瘤细胞的培养。

动物细胞大规模培养中还需添加的非营养性的补充物包括两种:羟甲基纤维素(浓度为0.11%),具有减少搅拌、通气或灌注培养中产生的剪切力对细胞的机械损伤作用jpluronic F68 (polyglgol)(浓度为0.11%)具有减少在搅拌或通气培养中由于血清的存在而产生泡沫的作用,但它抑制了血清的贴壁作用,降低了细胞的黏附能力。

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