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文健恒 华南农业大学动物医院 前言 血常规检查是我们兽医临床常用到的检查，一方面可以用在评估患病动物有无贫血、炎性疾病及血小板紊乱疾病，另一方面可以监控接受治疗的患病动物的病情趋势，还有就是可以用于动物的体检、疾病的筛查。 在过去的临床诊疗中，兽医师进行血常规检查时，重点往往放在了数据的判读上，严谨的医生还会进行血涂片检查。实际上，血液常规检查应该包括数据、图形（三分类和五分类）和细胞形态学三个部分。 最初图形检查主要用于提示机器给出的数据可靠与否，而随着应用的深入，图形的变化也可以起到提示某些细胞形态变化的作用，可以将明显异常的动物筛选出来再进行血涂片检查，大大地减轻血涂片人工劳动。 图形检查根据仪器白细胞分类性能不同，分为三分类直方图和五分类散点图，上一期更新分享了三分类直方图的意义和应用，大家应该可以体会到单纯根据细胞体积大小进行细胞分类的局限性和不准确性，临床上我们需要更先进的细胞分类方法。 白细胞五分类是比较先进的血细胞分析仪，目前兽医临床可以接触到的五分类仪器有深圳迈瑞BC-5000VET、日本希森美康xn1000v和xs800i、德国西门子advia2120。每一款仪器的实现白细胞五分类的方式都有各自特点，图形也有所差异。本期将先以迈瑞动物五分类血液细胞分析仪BC-5000VET为例，研究白细胞五分类散点图在临床中的应用，下一期更新会分享日本希森美康xn1000血细胞分析仪的五分类散点图。 原理 迈瑞BC-5000VET的白细胞五分类是通过细胞化学染色、光学法测量细胞参数而实现分类的。仪器吸取血液样本后，会分成两部分进行检测，一部分是红细胞和血小板检测，一部分是白细胞检测。 白细胞检测时，试剂首先会将样本中的红细胞，然后针对白细胞胞浆成分进行化学染色（主要是酶类），这一处理可以将淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞以及嗜碱性粒细胞的结构差异度放大。 然后白细胞在鞘液的包裹驱动下，呈单细胞纵列逐个通过光学测量通道。在光学通道中，有一束激光垂直入射照射每一个细胞，激光照射细胞时便会产生三个光学信号，分别代表该细胞的一些形态特征，这些光学信号将会被预先设置的传感器所接受感知，仪器接根据这些光学信号对每一个细胞进行分类，有类似光信号的细胞会聚集成一群的，发生聚集成群的细胞往往会是同一类型的白细胞，从而实现了白细胞的精确分类计数。 细胞通过光学通道形成的三个光学信号，分别是：LAS低角度激光散射信号，反映细胞体积大小信息；MAS中角度激光散射信号，反映细胞核结构复杂程度；WAS高角度激光散射信号，反映细胞胞浆颗粒度信息。三个信号就能够标示一个白细胞，将细胞放入根据LAS、MAS和WAS建立的三维坐标系，就能够清晰反映细胞分群的情况。一个点即是一个白细胞。 判读 同种类的正常健康动物的白细胞群位置是相对固定的。影响细胞群位置分布的因素主要有：1、物种：不同种类的动物，白细胞形态的差异，具体空间位置会有不同；2、疾病：炎性疾病、白血病等由于不同病因，导致不同系列的白细胞发生形态变化，则发生形态变化的白细胞的细胞群位置与正常动物相比会有变化；3、样本采集是否恰当无凝集。 细胞群分布模式图 上图是白细胞散点图分析的主要坐标图，横坐标为MAS，代表细胞核结构复杂程度；纵坐标为LAS，代表细胞体积大小。一个点代表一个细胞，则图形的亮度，可代表细胞量的多少。 所以一些细胞碎片会出现在坐标轴零点坐标附近，在图上是标记为GHO的深蓝色三角形或双峰团块。 成熟淋巴细胞的体积大小在白细胞中是比较小的，而且细胞核结构较简单，所以分布在细胞碎片的上方，在图上标记为LYM的绿色团块，呈橄榄形或枣核形，与上方粉紫色MON单核细胞团块分离彻底无粘连。如果在疾病的时候，淋巴细胞出现反应性变化，图形也会出现异常变化。发生核异形或者胞浆颗粒时，MAS的信号会升高，但细胞大小没有出现明显增大，则在正常淋巴群的右边发生一个“出芽样”的细胞群ALY；发生胞浆增多、出现空泡、淋巴细胞体积增大时，LAS信号会增强，但细胞核没有出现明显的变化，则在正常淋巴群的上方发生一个“出芽样”的细胞群ALY，与上方粉紫色MON单核细胞团块发生粘连接触。 正常的单核细胞，细胞大小比淋巴细胞大，细胞核形态比淋巴细胞复杂，但比嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞简单，所以在图上是纵向最上方，水平方向较淋巴细胞群稍偏右的圆形粉紫色MON细胞群。该细胞群正常时与淋巴群分离清晰，但会与右侧的嗜中性粒细胞有部分粘连。 正常的嗜中性粒细胞大小与单核细胞接近，细胞核的结构比单核细胞复杂，但比嗜酸性粒细胞稍简单，所以分布在粉紫色MON单核细胞群的右侧，大红色嗜酸性EOS的左侧，标记为NEU的浅蓝色团块。成熟的嗜中性粒细胞由于核结构更复杂所以位置偏右，杆状核的嗜中性粒细胞由于和结构稍简单所以位置会偏左。与粉紫色MON单核细胞群接触的嗜中性粒细胞为杆状的粒细胞。需要注意的是，正常动物的单核细胞的团块和嗜中性粒细胞的团块的边界上限是在同一水平。 当发生明显核左移的时候，嗜中性粒细胞群会覆盖但系细胞群。在炎性疾病状态下，嗜中性粒细胞还会发生病理性变化时，在图形上会发生嗜中性粒细胞团块的边界上限和下限会扩大，高于单核细胞团块的边界上限。 嗜酸性粒细胞细胞结构最复杂，所以会位于图形的最右侧的深红色EOS细胞团块，犬的靠近嗜中性粒细胞，猫的则呈麦穗样洒出。 正常健康犬的散点图分布 正常健康猫的散点图分布 白细胞下降 一个点代表一个细胞，图形散点的减少代表细胞数量的下降。上图是一白细胞减少的患犬病例，从图形可以直观地看到散点量明显减少，提示细胞量减少，尤其是淋巴细胞减少尤为显著。 白细胞升高 一个点代表一个细胞，图形散点的增多代表细胞数量的升高。上图是一白细胞增多的病例，从图形可以直观看到，白细胞量明显升高。具体的细胞群，可以看到深蓝色的细胞碎片、浅绿色的淋巴细胞群形态和数量正常。发生异常的是嗜中性粒细胞团块，细胞散点增多，上下限边界与正常的对比明显增宽，而且覆盖单核细胞群。这一变化提示嗜中性粒细胞明显增多，杆状核粒细胞增多，并且发生了严重的病理性变化。下图是该病例的血涂片，我们可以见到环形核，胞浆蓝染，胞浆杜勒小体，而且还有多分叶的情况。 白细胞病理性变化 异常淋巴细胞 上图是一犬瘟患犬。从图形可以直观获得白细胞增多，嗜中性粒细胞发生核左移，少量的细胞病理性变化。另一显著异常的细胞群是淋巴群，上方出芽与单核细胞群接触，右侧也出芽，提示有大淋巴细胞和核异形的淋巴细胞出现。异形淋巴细胞的出现，会提示抗原的接触，尤其是病毒。下图是该病例的血涂片，可见异常的淋巴细胞，而且数量比较多。 异常淋巴细胞 以上就是迈瑞BC-5000VET的白细胞五分类散点图的判读方法和一些常见的图形改变所提示的细胞变化，今后将定期分享一些病例，更详细地展示白细胞散点图在临床的应用。 |
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