血细胞分析仪的白细胞五分群原理与散点图

【前言】现在血细胞分析仪已经十分普及，在减轻工作压力的同时提升了效率。然而，血细胞分析仪检测出来的结果，真的就是各种白细胞/红细胞/血小板的数值吗？并不见得！仪器实际上是获得待测细胞的一些参数和信号，将符合某些参数/信号的粒子划归为某种细胞，这一原理就决定了仪器一定会有犯错的时候。观察散点图有助于发现这些问题，但也不是万能的。所以，一定要制定复检规则并良好的执行，显微镜万万不能丢。

审核血常规报告时，除了仪器报告的结果（包括历史结果），也应观察仪器给出的直方图散点图，并结合临床资料。

一、VCS技术

这是贝克曼/库尔特（Beckman/Coulter）血细胞分析仪的专利技术。

VCS分别是体积（volume）、传导性（conductivity）和光散射（scatter）的缩写，是五分群血细胞分析仪采用的技术之一。

VCS计数检测内容见表3-2

它采用三个独立的能量来源在流动池内检测白细胞，将这三者结合，可以将白细胞分为五群（三种粒细胞和淋巴、单核细胞），见表3-3。

以下是VCS细胞检测立体散点图：

【注释】

M：单核细胞

L：淋巴细胞

N：中性粒细胞

E：嗜酸性粒细胞

B：嗜碱性粒细胞

特别说明：N区和L区之间稀少的白色散点对应嗜碱性粒细胞（B）

以下是仪器给出的平面散点图：

你发现了吗？血细胞分析仪给出的散点图看似是二维的，其实是三维的

【注释】

A区：单核细胞（下图中的M）

B区：嗜酸性粒细胞（下图中的E）

C区：中性粒细胞（下图中的N）

D区：淋巴细胞（下图中的L）

C区和D区之间那些稀少的白色散点，就是嗜碱性粒细胞。

【小编注】贝克曼/库尔特（Beckman/Coulter）血细胞分析仪的一张白细胞散点图中，包括了外周血中常见的五类白细胞（包括嗜碱性粒细胞），而其他品牌的血细胞分析仪基本上做不到（一般都需要两张散点图）。

下图中的数字，是异常成分出现的位置：

【注释】

1、幼稚单核细胞

2、幼稚粒细胞

3、未成熟粒细胞

4、中性杆状核粒细胞增多

5、幼稚淋巴细胞

6、异型淋巴细胞

7、小淋巴细胞增多

8、有核红细胞/血小板簇

9、大血小板

10、红细胞内寄生虫（如疟原虫）

二、电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法

这是希森美康（Sysmex）血细胞分析仪采用的技术，国货迈瑞（Mindray）血细胞分析仪采用的技术/散点图与之相似。

（一）4 DIFF（四分群）通道

利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术，采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板，白细胞膜仅部分溶解。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内，使DNA、RNA和细胞器着色。因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例，所以未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深，成熟白细胞荧光染色浅，从而得到4DIFF（四分群）白细胞散点图（如下）。

XN系列中与该通道对应的是WDF通道，散点图分布基本一致。

（二）WBC/BASO通道

在碱性溶血剂作用下，除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩，经流式细胞术计数，可得到WBC/BASO百分率和绝对值及WBC/BASO散点图（如下）。

最新的XN系列无此通道。

（三）未成熟髓细胞信息通道（IMI）

采用射频、电阻抗和特殊试剂结合法。在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼稚细胞膜脂质含量高，结合硫化氨基酸的量多于较成熟的细胞，对溶血剂有抵抗作用。加入溶血剂后，成熟细胞被溶解，只留下幼稚细胞和异型/异常淋巴细胞（如下图），报告百分率和绝对值，并提示核左移。

XN系列无此通道。

（四）散点图解读

注意上图中的D部分，希森美康老系列仪器和迈瑞的仪器都有专门的有核红细胞通道，散点图分布也类似。但该通道需要配备专门的有核红细胞试剂，故限制了其应用。

【注释】

注意：部分名词已在上图下面的小字中注释

①Ghost：影细胞

②Lymph：淋巴细胞

③Mono：单核细胞

④Atyp lymph：异型淋巴细胞

⑤Neut：中性粒细胞

⑥Eos：嗜酸性粒细胞

⑦Baso：嗜碱性粒细胞

⑧Imm gran：幼稚粒细胞

⑨Blast：原始/幼稚细胞

⑩PLT clump（上图中写错了，下图中是正确的）：血小板（聚集成）团块

【注释】

①Left Shift：核左移

②Blast lympho：原始/幼稚淋巴细胞

③NRBC：有核红细胞

值得一提的是，迈瑞的散点图与之类似；另外，这俩机型有时候会出现原始细胞位于正常单核细胞区域的情况，需要警惕。

（五）WNR通道

在希森美康最新的XN系列中，仪器将WBC/BASO通道和NRBC通道整合为WNR通道

以下为三维散点图（注意其中的中英注释）：

以下为平面散点图（模式图）：

相比于老系列仪器，XN系列在仅进行全血细胞计数（即CBC模式检测）时，依然能检测有核红细胞（换言之，检测所有标本都会判断有无NRBC，并进行计数）。

（六）WPC通道

在希森美康最新的XN系列中，仪器将IMI 通道升级为WPC通道（但不是所有XN系列仪器都具备这个功能），以下为平面散点图：

【注释】

①Abnormal lymph：异常淋巴细胞

②Blast：原始/幼稚细胞

③Granulocyte：粒细胞

相比于老系列仪器，XN系列能在WDF和WPC两个通道判定可疑异常白细胞的性质，灵敏度与IMI 通道相当，特异性则更好。

【小编注】关于希森美康最新的XN系列与老系列散点图的区别，可参考本轮推送的第二篇文章

三、钨光源散射与细胞化学方法

这是西门子（Simens）ADVIA系列血细胞分析仪采用的技术

（一）过氧化物酶（POX）染色通道

在白细胞通道加入溶血剂和POX染色剂，可计算MPXI，得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞或单核细胞的相对POX活性（淋巴细胞和嗜碱性粒细胞无POX活性）。形成以POX分布强度为X轴、以细胞体积为Y轴的散点图，进行白细胞计数与分类。

【注释】

①，对应下图中的NO：噪音

②，对应下图中的NRBC：有核红细胞

③，对应下图中的P：血小板聚集

④，对应下图中的L：淋巴细胞+嗜碱性粒细胞

⑤，对应下图中的LUC：未染色大细胞

⑥，对应下图中的M：单核细胞

⑦，对应下图中的N：中性粒细胞

⑧，嗜酸性粒细胞

值得一提的是：

1、下图中有公众号水印的区域是嗜酸性粒细胞（对应上图中的⑧），并不是有核红细胞；

2、有核红细胞（NRBC）区在L区的下方，即上图中的②。仔细观察下图，能看到L区的下方有个白色箭头。

【小编吐槽】箭头弄成这个颜色也太容易导致误解了...

（二）嗜碱性粒细胞/核分叶性通道

苯二酸完全破坏红细胞和血小板；除嗜碱性粒细胞外，其他白细胞膜溶解，胞质溢出，仅剩裸核。完整的嗜碱性粒细胞呈高角度散射，位于散点图上部；裸核则位于下部，可进行白细胞计数和嗜碱性粒细胞计数。根据不同细胞的裸核结构进行白细胞分类计数（如下图）。根据多分叶核（PMN）和单个核（MN）的比例，可计算出核左移指数（LI）。LI越高，说明核左移程度越大。

（三）未染色大细胞计数（LUC）检测

在POX通道，可检测到无POX活性、体积大于正常淋巴细胞体积平均值2个标准差的细胞，如异型淋巴细胞、浆细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细胞。

但需要注意的是，存在POX活性减低甚至缺失的人群，此时ADVIA系列将无法进行白细胞分类，需要更换采用其他原理进行白细胞分类的仪器进行检测。

【小编注】关于ADVIA系列血细胞分析仪更详细的内容，可参考本轮推送的第三篇文章。

四、多角度偏振光散射方法  

这是雅培（Abbott）CD系列血细胞分析仪的专利技术。

多角度偏振光散射法（MAPSS）应用（氦氖）激光流式细胞术，分4个角度检测细胞。嗜酸性粒细胞颗粒丰富，可消除偏振光，以此中性粒细胞相鉴别。

模式图一：

模式图二：

MAPSS检测内容：

（一）0°和7°散点图：

（二）90°垂直角度散射光（偏振光）：

（三）90°垂直角度消偏振散射光（去偏振光），90°垂直角度散射光（偏振光）：

鞘液中的DNA染料碘化丙啶可破坏有核红细胞膜，只留下裸核而将其染色。染料对有活性的白细胞只有极小渗透性或无渗透性，故其细胞核不染色。通过多散点图分析（MSA），可鉴别有核红细胞、无活性白细胞和脆性白细胞，计算活性白细胞比率和计数有核红细胞（如下图）。