影响因子:22.673 发表期刊:European Heart Journal 发表时间:2020年7月13日(预印版) 关键技术:H3K27me3 ChIP-seq、ChIP-qPCR、RNA-seq、RIP-seq 由慢性高血压,遗传易感性或主动脉瓣狭窄引起的病理性肥厚导致适应性重塑不良,并常常伴随着心室功能障碍,继而导致心力衰竭和死亡。有报道一些长链非编码RNA(lncRNA)在心脏肥厚中起关键作用。 从高度保守的父源印迹基因位点转录的lncRNA H19已被证明在小鼠胚胎和出生早期生长调控中发挥重要作用。然而,尚不清楚H19是否具有心脏保护作用或是否促进心脏疾病。 由于H19的表达在主动脉弓缩窄(TAC)诱发压力超负荷引起的左室心力衰竭后达到峰值,但在肥厚性心脏重构的失代偿期被强烈抑制,因此作者推测H19可能具有心肌特异性保护功能,可以用作治疗靶标。 作者首先在成年小鼠的各种不同组织中证明,H19是肌肉特异性的。 接下来,使用H19敲除小鼠(KO)研究H19是否在功能上参与了心肌肥厚的发展,TAC处理小鼠并监测6周。与野生型小鼠相比,TAC后H19-KO小鼠的心脏重量显著增加,伴有心脏尺寸增加的趋势,此外还伴随着心肌细胞大小增加和Mcip1.4表达增加。 为了研究H19作用下的心肌细胞特异性分子变化,作者对TAC处理后6周来自野生型和H19 KO心脏的纯化心肌细胞进行了mRNA表达谱分析。通过GSEA分析发现,H19 KO心肌细胞共富集347个基因集。其中发现了一些与心脏病和肥厚相关的通路,如NFATc3和转化生长因子(TGF)信号通路等(图1)。相比之下,野生型心脏中只有四组基因富集,它们都与炎症反应通路相关。 图1 TAC后6周,来自H19 KO和WT(n = 3)心肌细胞GSEA分析 H19之前被证明与癌细胞中的增强子Zeste 2(EZH2)相互作用,这是组蛋白甲基转移酶多梳抑制复合物2(PRC2)的一个成分,主要对组蛋白H3(H3K27me3)上的27个赖氨酸残基进行三甲基化。通过数据分析表明,H19中心区域和EZH2之间具有很高的相互作用倾向,并且使用RIP-seq证实了这种相互作用。利用siRNA敲低H19可以消除富集作用,表明H19与EZH2的相互作用具有特异性。为了进一步了解H19对PRC2的调控作用,作者对H19沉默(siRNA)或过度表达(慢病毒)后在HL-1细胞中进行了H3K27me3 ChIP-Seq实验。H19的抑制导致H3K27me3的整体增加,这是siRNA条件下特有的。相反,H19过表达后的H3K27me3水平与对照组相当,这表明高水平的H19对PRC2没有超剂量作用(图2A–C)。在差异最大的基因座中,发现了抗肥厚性NFAT调控子Tescalcin (Tesc)基因座在H19 siRNA处理后高度甲基化(图2D)。ChIP-qPCR实验证实了这一点(图2E)。 过表达H19对Tesc H3K27me3或mRNA表达没有影响(图2F)。已知Tescalcin可通过抑制钙调神经磷酸酶和使GSK3保持其活性形式来磷酸化NFAT来进行核排斥,从而作用于NFAT通路。因此,作者测试了Nfatc3的表达和活性,通过WB和ChIP-qPCR发现敲低H19后Nfatc3蛋白水平升高,Nppb和Mcip1.4靶启动子上的Nfatc3活性升高(图2G,H)。总之,这表明H19通过防止PRC2介导的Tesc基因座表观遗传抑制而起NFAT信号转导的关键抑制作用。 图2 H19表达的调节改变HL-1细胞中的H3K27me3模式此外,作者还通过体外和体内实验证明,H19的过表达可以改善肥厚性反应,有助于防止体内肥厚,并且当心脏肥厚已经建立时,H19疗法也有效。 该文的数据突出显示了H19是一种抗肥厚性lncRNA,为进一步治疗病理性心肌肥厚的H19疗法的临床前和临床开发铺平了道路。 |
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