  客户通过前期高通量筛选发现C8orf76在胃癌（GC）中拷贝数增加，并且在两个独立的GC病人队列中验证发现C8orf76的表达上调。 接着通过一系列细胞、动物实验证明C8orf76在GC中扮演促进细胞增殖、迁移/入侵、肿瘤发生/转移的重要作用。 通过对shC8orf76细胞和对照细胞进行RNA-seq分析发现在MAPK信号通路、细胞循环，p53，wnt，TGF, 凋亡和ErbB的异常调节，说明C8orf76通过激活MAPK信号通络而促进肿瘤的发生。 通过预测发现C8orf76是核内的潜在转录因子，经ChIP-seq（由伯豪生物提供）分析发现C8orf76会直接调控lncRNA DUSP51P，最后发现siRNA DUSP5PA后，会明显抑制癌症进程。 因此全文通过完整的实验设计证实了C8orf76直接与致癌的lncRNA DUSP5P1结合以诱导其表达并激活MAPK信号传导，从而促进癌症发生，同时还发现C8orf76可作为GC患者的预后因子。 研究背景 胃癌排全球癌症死亡率第三位，大约一半的胃癌患者的DNA会表现出染色体不稳定性，包括基因拷贝数的增加和减少。 早前已证明染色体的拷贝数扩增经常发生在染色体区域8q22,8q24和20q11-q13，并且与胃癌患者短暂的生存期显著相关。与邻近的非肿瘤粘膜组织相比，C8orf76（即8染色体的第76个开放阅读框）是一种核蛋白编码基因，在原发性胃癌中优先扩增。 C8orf76基因位于染色体8q24.13上。已有相关文献报道C8orf76过表达与肾癌，子宫内膜癌和乳腺癌的不良预后相关，因此在本研究中，作者评估了C8orf76在胃癌中的拷贝数扩增和过表达状态，并描述了C8orf76在胃癌发生中的功能机制和临床影响。 研究路线 （建议保存下来放大看）  主要结果 图1 早期胃癌阶段，C8orf76的高表达与患者的不良预后显著相关。  图2 C8orf76表达的细胞系的入侵能力明显高于对照组，在敲除C8orf76基因后的入侵和转移能力明显降低。（GES1为正常胃上皮细胞系，AGS, BGC823, MKN74, MGC803, KatoIII, and SNU719 为6种胃癌细胞系）  图3 为了探究C8orf76是否是GC治疗的潜在靶点，从3个不同类型GC病人分离的细胞构建类器官，而在敲除C8orf76基因的PDO细胞生长显著受到抑制。因此C8orf76可以作为GC治疗的潜在靶点。  图4 对敲除了C8orf76 的 BGC823 & MKN74 细胞和对照细胞进行RNA-seq分析shC8orf76的KEGG结果显示富集在MAPK信号通路、细胞循环，p53，wnt，TGF, 凋亡和ErbB的异常调节。通过荧光素酶实验发现shC8orf76细胞系的MAPK信号通路受抑制，因此C8orf76可通过激活MAPK信号通路促进肿瘤发生。  图5 通过预测知道C8orf76是位于核内且具有锌指结构的潜在转录因子，并通过WB和荧光免疫技术验证了其位于核内。  图6 对转染了C8orf76和空载的GES1细胞进行chip-seq，有25个peak位于promoter区，25个基因经筛选得到5个，经chip-PCR验证确定4个基因受到C8orf76的调控，其中就包括DUSP51P。  图7 为进一步探讨GC中C8orf76的促癌作用是否依赖于DUSP5P1，通过siRNA DUSP5P1实验发现，在siRNA DUSP5P1后显著抑制癌症进程，因此DUSP5P1的过表达会促进癌症进程。  图8 作者整理发现在胃癌发生中C8orf76和lncRNA DUSP5P1的作用机制线路图 敲重点 文章整体逻辑严密，一步接一步的验证让小编佩服，当然文章前期的数据投入量也挺大的。但是小编认为文章最值得借鉴的地方是最后的机制研究，通常当我们发现DNA层面的差异基因后，最多再做下差异表达和动物实验的验证，来完善整体的研究思路，但是在这里作者为了使文章更丰富在最后做了ChIP-seq分析，找了与C8orf76相互作于的lncRAN DUSP5P1，并发现C8orf76作为转录因为与lncRNA DUSP5P1结合，会抑制MAPK磷酸激酶通路，通过促进细胞增殖，分裂、转移同时抑制凋亡来促进癌症进程。 参考文献 Wang X, Liang Q, Zhang L, et al. C8orf76 promotes gastric tumorigenicity and metastasis by directly inducing lncRNA DUSP5P1 and associates with patient outcomes[J]. Clinical Cancer Research, 2019, 25(10): 3128-3140. |
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