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作者：解螺旋.毛博 转载请注明来源：解螺旋，医生科研助手 做贴壁细胞的实验，经常需要做细胞铺板。这个实验看似简单，其实也不是那么好做的。关键是要铺得均匀铺得平整，要是中间密周围稀，或者周围密中间秃顶，那就露怯啦。这里，毛博给大伙儿分享一些技巧，按照实验步骤的前后顺序排列，并且总结为几句顺口溜，方便记忆。 1收集细胞要混匀消化后的细胞一定要充分混匀，要把聚在一起的细胞团充分地吹打开，最好是单个的状态，但同时又不能损伤细胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。离心也很有讲究，一般用1000 rpm/min即可。离心力太大细胞容易抱团！然后悬浮离心后的细胞团时，先不要把所有液体都加进去！一般先加2mL液体，然后用1mL移液器轻轻将细胞吹起，细胞要像云雾一样散开，这样易于形成单细胞。象下图所示的这种移液器就非常好用。 2接种细胞须小心铺6孔板，12孔板或24孔板，先在每个孔里面加1mL的培养基，晃动使之铺匀整个孔底，然后加入1 mL的细胞悬液。从孔的左边靠近底部慢慢加入，这样细胞悬液会平铺在整个孔底，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这里又有一个窍门，放在显微镜的载物台上面。因为显微镜的载物台是水平校正过的，比什么桌面、超净台什么的要平多了。在载物台上放置20-30分钟，细胞不差这一会温度和二氧化碳的，等细胞贴壁了，轻轻移入到孵箱中。 铺96孔板，我每孔是加100微升细胞悬液，加完半边板48孔后，将剩下的未加的细胞悬液再混一下，再继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度，敲三次即可，太大力或次数太多会导致细胞集中成堆。也有人推荐轻微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。 3轻轻敲打勿抱团细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。如果有抱团的话，用手指从底部轻轻敲打，使之分散。也可以用平板振荡器稍稍振荡一下，效果不错。参数要设置成振幅小而频率高哈。 4十字交叉要水平观察和敲打后放入培养箱，然后画“十字”，就是把细胞培养板贴着培养箱搁板，前后方向来回晃动10次，再左右方向晃动10次，正好是一个“十” 字形。然后就让它静静地呆在培养箱搁板上，没事不要去动它。这里要注意的是，托架应该装在四根立柱相同高度的孔上，培养箱的搁板要水平校正，尽量地做到水平。搁板会向一个方向倾斜，对于贴壁时间长的细胞，就算当时混匀了，放进培养箱后也摇匀了，但是重力作用下细胞也会向一侧聚集。 培养箱里面或者外面尽量不要放可以产生振动的仪器，比如蠕动泵、离心机、涡旋器一类的仪器。这些仪器产生的振动对细胞贴壁有影响，也可能会导致细胞贴壁不均匀。还是要给细胞一个安安静静的生长环境，让他安静地做个美男子好了。 细胞铺板不难，但是细节很多，须知“魔鬼都在细节中”。理想的细胞铺板应该是下图这样的。希望大家都能够铺出这样漂亮的细胞来。
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