【原】CRISPR/Cas9基因编辑动物构建的基本流程？

① 针对特定基因序列，利用软件（sgRNA Designer）预测潜在 sgRNA 序列，并依据实验要求挑选合适的靶点；

② sgRNA 活性筛选，选出有活性且特异性高的 sgRNA； 

③ 构建 sgRNA 表达载体，并利用 T7 体外转录试剂盒进行 sgRNA 体外转录；

④ 利用 SP6 转录试剂盒进行 Cas9 mRNA 体外转录；

⑤ 将 Cas9 mRNA 和 sgRNA 按合适浓度混匀，并进行受精卵显微注射；

⑥ 注射后的受精卵移植到假孕母鼠体内继续发育；

⑦ 待子代小鼠出生后对其进行基因型分析。