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其实引物稀释是个很简单的问题，关键就是搞清楚单位 例如： 引物合成单中： 4.29nmol/OD ////// Volume for 100uM:42.9ul/OD 方法1 使用前面的nmol数计算： 如果想将引物稀释为20pmol/ul，则稀释的体积为：4.29/20*1000=214ul 方法2 使用后面的ul计算 如果想将引物稀释为20uM，则稀释的体积为：42.9*5=214ul 可见两种方法的稀释体积事一样的，但是为何最终的引物一个事uM一个是pmol/ul呢？ 其实很简单，只要看清单位即可： 1uM＝1umol/L=1000000pmol/1000000ul=1pmol/ul 不用电脑来算吧，口算都可以了。合成引物的nmol数除以你想得到的引物浓度数，×1000就是你要加的H2O的量(μl)。比如引物干粉是9.3nmol，需要稀释成25pmol/μl，就用9.3/25=0.372 0.372×1000=372μl H2O，OK搞定了! 合成引物的nmol数除以你想得到的引物浓度数，×1000就是你要加的H2O的量(μl)。确实是这样的啊 推荐一个简单的公式， 加水量=引物的nmol数/2 x 100ul, 则你的引物浓为２０uM, 在编人员５０ul反应体系中加1ul即可． 加水量=引物的nmol数 x 10ul, 则你的引物浓为１００uM, 1OD约为33ug，合成的引物会附有说明书，上面写的有OD数值，MV。 如果是2OD，MV＝5000 质量＝2*33=66ug 摩尔数=66/5000=0.0132umol 配制成100μM所需要加的水的量＝0.0132/100*10的6次方＝132ul 即配制成100μM所需要加的水的量＝OD数*33/MV×10000ul 一般先配成100uM作为储存浓度，然后再由100uM稀释至20uM或者10uM作为工作浓度。 注意打开管子前先离心。 引物2： ？µg/µmol,2OD—>加水(2*33/？)*20000=µl [（OD*33/M.W）*20000] ，使浓度为50pmol/ ul 用灭菌去离子水稀释前，两管先离心甩一下，以防止开盖时引物粉末飞出。加入灭菌去离子水后—>-20℃保存。 ？ng/umol是在引物合成公司给你的引物时带子里的两张小条子写的多少ng/mol，举个例子，比如说：引物1是7321ug/mol,2OD —>加水(2*33/7321)*20000=170.32µl [（OD*33/M.W）*20000]，使浓度为50pmol/ ul（OD＝A260/A280 呵呵，稀释后以3ul分装，表明是引物1还是引物2，呵呵，这是个很好的公式，记得用哈，祝你试验成功 我看楼上的都加水稀释，这样保存引物不会降解吗？我们实验室基本都用0.1倍的TE稀释或5毫摩尔的Tris稀释。最好稀释成终浓度为100微摩尔保存。 ############################################################## 摩尔数=质量/分子量 摩尔浓度=摩尔数/体积 1M＝1mol/L 如：某药物A分子量为500，欲得到200mM（0.2M）的A储存药液10ml（0.01L），其计算方法为： 0.2M*0.01L*500＝1（g） 即称取1g药物A，溶于10mL溶剂中，便得到200mM浓度的A液。 将200mM药液A稀释为20mM，2mM，0.2mM，～ 各3.15mL（例如给24孔板加药）方法为： 取0.35mL200mM A液+3.15mL培液 得3.5mL 20mM A液； 取0.35mL20mM A液+3.15mL培液 得3.5mL 2mM A液； 取0.35mL2mM A液+3.15mL培液 得3.5mL 0.2mM A液； 依次类推～ 再如，将200mM药液A倍比稀释为100mM，50mM，25mM，～ 各3.15mL（例如给24孔板加药）方法为： 取3.15mL200mM A液+3.15mL培液 得6.3mL 100mM A液； 取3.15mL100mM A液+3.15mL培液 得6.3mL 50mM A液； 取3.15mL50mM A液+3.15mL培液 得6.3mL 25mM A液； 依此类推～ 药液稀释需要仔细推算，掌握好用量，熟练后就不是难事了^_^ 以上仅仅是举几个比较实用的例子，具体实验中需要灵活应用。希望对楼主有所参考和帮助。 先配成较高浓度储存液，如配成10mL10uM（1M＝1mol/ L，1M＝1000mM，1mM＝1000 uM，1uM＝1000 nM）： 换算方法如下： 1、1摩尔（mol）=1000毫摩尔(mmol) 2、1毫摩尔(mmol)=1000微摩尔(μmol) 3、1微摩尔(μmol) = 1000纳摩尔（nmol） 4、1纳摩尔（nmol）=1000皮摩尔（pmol） 5、1 mmol/L=1000 μmol/L=1000 000nmol/L |
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