手把手教你食品中苯并芘(a)的测定！

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食品中苯并芘(a)的测定

1范围

本标准适用于谷物及其制品(稻谷、糙米、大米、小麦、小麦粉、玉米、玉米面、玉米渣,玉米片)、肉及肉制品(熏、烧、烤肉类)、水产动物及其制品(熏、烤水产品)油脂及其制品中苯并(a)芘的测定。

2原理

试样经过有机溶剂提取，中性氧化铝或分子印迹小柱净化，浓缩至干，乙腈溶解，反相液相色谱，分离荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1甲苯：色谱纯。

3.1.2乙腈：色谱纯。

3.1.3正已烷：色谱纯。

3.1.4二氯甲烷：色谱纯。

3.2 标准品

苯并(a)芘标准品:纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

警告一苯并(a)芘是-种已知的致癌物质，测定时应特别注意安全防护!测定应在通风柜中进行并戴手套，尽量减少暴露。如已污染了皮肤，应采用10%次氯酸钠水溶液浸泡和洗刷，在紫外光下观察皮肤上有无蓝紫色斑点，一直洗到蓝色斑点消失为止。

3.3标准溶液配制

3.3.1苯并(a)芘标准储备液(100 ug/ mL):准确称取苯并(a)芘1 mg(精确到0.01 mg)于10 mL容量瓶中，用甲苯溶解，定容。避光保存在0 ℃~5 ℃的冰箱中，保存期1年。

3.3.2苯并(a)芘标准中间液(1.0 ug/mL):吸取0.10 ml苯并(a)芘标准储备液( 100 pug/ mL)，用乙腈定容到10ml。避光保存在0℃~5℃的冰箱中，保存期1个月。

3.3.3苯并(a)芘标准工作液:把苯并(a)芘标准中间液(1.0 ug/mL)用乙腈稀释得到0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/ mL、10.0 ng/ mL、20.0 ng/ mL的校准曲线溶液，临用现配。

3.4材料

3.4.1中性氧化铝柱:填料粒径75 μm~ 150 μm，22 g，60 mL。

注:空气中水分对其性能影响很大，打开柱子包装后应立即使用或密闭避光保存。由于不同品牌氧化铝活性存在差异，建议对质控样品进行测试，或做加标回收试验，以验证氧化倡活性是否满足回收率要求。

3.4.2苯并(a)芘分子印迹柱:500 mg，6 mL。

注:由于不同品牌分子印迹柱质量存在差异，建议对质控样品进行测试，或做加标回收试验,以验证是否满足要求。

3.4.3微孔滤膜:0.45μm。

4仪器和设备

4.1液相色谱仪:配有荧光检测器。

4.2分析天平:感量为0.01 mg和1 mg。

4.3粉碎机。

4.4组织匀浆机。

4.5离心机:转速≥4 000 r/min。

4.6涡旋振荡器。

4.7超声波振荡器 。

4.8旋转蒸发器或氮气吹干装置。

4.9固相萃取装置。

5分析步骤

5.1 试样制备.提取及净化

5.1.1谷物及其制品

预处理:去除杂质，磨碎成均匀的样品，储于洁净的样品瓶中，并标明标记，于室温下或按产品包装要求的保存条件保存备用。

提取:称取1 g(精确到0.001 g)试样，加入5 mL正己烷，旋涡混合0.5 min，40 ℃下超声提取10 min，4000 r/min离心5 min，转移出上清液。再加入5 mL正己烷重复提取一次。合并上清液，用下列2种净化方法之一进行净化。

净化方法1:采用中性氧化铝柱，用30mL正己烷活化柱子，待液面降至柱床时，关闭底部旋塞。将待净化液转移进柱子，打开旋塞，以1 mL/min的速度收集净化液到锥形瓶，再转入50 mL正己烷洗脱，继续收集净化液。将净化液在40℃下旋转蒸至约1 mL，转移至色谱仪进样小瓶，在40℃氮气流下浓缩至近干。用1mL正己烷清洗茄形瓶，将洗涤液再次转移至色谱仪进样小瓶并浓缩至干。准确吸取1mL乙腈到色谱仪进样小瓶，涡旋复溶0.5min，过微孔滤膜后供液相色谱测定。

净化方法2:采用苯并(a)芘分子印迹柱，依次用5mL二氧甲烷及5mL正己烷活化柱子。将待净化液转移进柱子，待液面降至柱床时，用6mL正己烷淋洗柱子，弃去流出液。用6 mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。将净化液在40℃下氮气吹干，准确吸取1mL乙腈涡旋复溶0.5min，过微孔滤膜后供液相色谐测定。

5.1.2熏烧、烤肉类及熏烤水产品

预处理:肉去骨、鱼去刺、贝去壳，把可食部分绞碎均匀，储于洁净的样品瓶中，并标明标记，于-16 ℃~-18℃冰箱中保存备用。

提取:同5.1.1中提取部分。

净化方法1:除了正己烷洗脱液体积为70 mL外其余操作同5.1.1中净化方法1。

净化方法2:操作同5.1.1中净化方法2。

5.1.3油脂及其制品

提取:称取0.4 g(精确到0.001 g)试样，加入5 mL正已烧，旋涡混合0.5 min，待净化。

注:若样品为人造黄油等含水油脂制品，则会出现乳化现象，需要4000r/min离心5min转移出正已烷层待净化。

净化方法1:除了最后用0.4 mL乙腈涡旋复溶试样外,其余操作同5.1.1中的净化方法1。

净化方法2:除了最后用0.4ml乙腈涡旋复溶试样外，其余操作同5.1.1中的净化方法2。

试样制备时,不同试样的前处理需要同时做试样空白试验。

5.2仪器参考条件

a)色谱柱:C18,柱长250 mm,内径4.6 mm,粒径5 um或性能相当者；

b)流动相:乙腈十水= 88+ 12；

c) 流速:1.0 mL/ min；

d) 荧光检测器:激发波长384 nm。发射波长406 nm；

e) 柱温:35℃；

f)进样量:20 uL；

5.3标准曲线的制作

将标准系列工作液分别注入液相色谱中,测定相应的色谱峰,以标准系列工作液的浓度为横坐标。

以峰面积为纵坐标,得到标准曲线回归方程。

5.4试样溶液的测定

将待测液进样测定,得到苯并(a)芘色谐峰面积。根据标准曲线回归方程计算试样溶液中苯并(a)芘的浓度。

6分析结果的表述

试样中苯并(a)芘的含量按式(1)计算:

式中:

X一试样中苯并(a)芘含量，单位为微克每千克(ug/kg)；

ρ一由标准曲线得到的样品净化溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；

V一试样最终定容体积.单位为毫升(mL)；

m一试样质量,单位为克(g)；

1 000一由ng/g换算成pug/kg的换算因子。

结果保留到小数点后一位。

7精密度

在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

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