研究表明，土壤中微生物的数量和种类都非常巨大，如果采用传统的划线
纯化分离法来研究土壤微生物群落的数量和组成，那么其中 90%以上的微生物
都无法覆盖到。因此，我们选择分子生物学的方法，从土壤中提取具有代表性
的微生物 DNA，并进行相应的 PCR 扩增和测序。这对于我们揭示不同地区的
土壤微生物种群分布和多样性来说有着重要的意义[1]。 图 1 土壤采样[2]
先让我们一起简单的了解土壤 DNA 的提取步骤，土壤样本的预处理采用陶
瓷珠和二氧化硅颗粒混合而成的玻璃珠，能够高效地裂解革兰氏阳性细菌、真
菌孢子、内生孢子、酵母、原核和真核藻类等土壤中的各类微生物
图 1 土壤采样[2]
先让我们一起简单的了解土壤 DNA 的提取步骤，土壤样本的预处理采用陶
瓷珠和二氧化硅颗粒混合而成的玻璃珠，能够高效地裂解革兰氏阳性细菌、真
菌孢子、内生孢子、酵母、原核和真核藻类等土壤中的各类微生物。
图 2 样品处理
接下来，我们使用天美最新研发的台式高速冷冻离心机 Velocity 18R Pro
和 FA15A 转头离心，去除可能堵住 DNA 吸附柱的杂质部分。
图 3 Dynamica V18R Pro 离心机和 FA15A 转头
本次我们使用的 Dynamica V18R Pro 和 FA15A (15,000rpm/21,500xg， 24x1.5/2ml) 角转头，V18R Pro 的所有转头都具有转头自锁功能，能够轻松装
卸，同时所有转头都能够高温高压灭菌，极大地保障了使用者的安全性。
具体步骤：
一、土壤样本预处理：
1. 取 500 mg 土壤样本至研磨管中。
2. 加入 980 µL 缓冲液，轻柔涡旋混匀。
3. 加入 120 μL 裂解液。
4. 将研磨管置于研磨仪中，40 Hz 处理 40 sec。
5. 12000 rpm 离心 5 min，沉淀碎片颗粒。
6. 转移上清液至 2 mL 离心管中。加入 250 μL 去蛋白液，手动摇晃混
匀。4℃放置 5 min。
7. 12000 rpm 离心 3 min，之后取不多于 900 μL 上清液，转移至 2 mL
离心管中。
8. 加入 1/3 体积的结合液，轻柔涡旋混匀。4℃放置 5 min。
9. 12000 rpm 室温离心 1 min。转移上清液至 5 mL 离心管中。
10. 加入 1.5 倍体积的缓冲液，立即吹打混匀。
二、DNA 提取：
1. 将 DNA 吸附柱套入 2 mL 收集管中，备用。
2. 将预处理混合液加入到 DNA 吸附柱中，12,000 rpm 室温离心 1
min，弃掉废液。
3. 将 DNA 吸附柱放回收集管，加入 600 µL 漂洗液，12,000 rpm 室温
离心 30 sec，弃废液。
4. 重复一遍步骤 3。
5. 将 DNA 吸附柱放回收集管，空柱 12,000 rpm 离心 2 min，以除去残
留的漂洗液。
6. 将 DNA 吸附柱放入新的洁净 1.5 mL 离心管中，在滤膜中央加入 30-
100 µL 洗脱液，室温放置 3 min。然后 12,000 rpm 离心 1 min，收集滤液即
为样本 DNA。
7. DNA 样品可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。
