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Frdbio® Strep-tag II标签蛋白纯化试剂盒用于纯化各种表达系统中含有Strep-tagII或者TwinStrep-tagII标签的重组蛋白，包括大肠杆菌表达系统、哺乳动物表达系统、酵母表达系统等等;本试剂盒配备了纯化蛋白所必需预装柱及核心试剂。 本试剂盒中预装柱的填料为Streptactin Beads 4FF。偶联到填料的蛋白配基为改良Streptactin蛋白，主要优势如下： 本蛋白纯化试剂特点： Ø Strep-tagII/TwinStrep-tagII这两个标签标小，并且对蛋白结构没有影响； Ø Strep-tagII/TwinStrep-tagII标签与Streptactin亲和力高，非6*His、GST之辈可比； Ø Streptactin Beads这个纯化可以耐受变性剂，在高浓度尿素和盐酸胍里仍然可以轻松挂柱，纯化包涵体不是障碍； Ø 生物素可以轻松洗脱，不需要昂贵的脱硫生物素； Ø 洗脱条件温和，不会对蛋白造成造成损伤； Ø 填料再生简单，反复使用，实验室测试表明再生15次后，Streptactin Beads填料效率没有明显降低。 产品主要参数： 基质：交联度4%琼脂糖凝胶 配体：改良Streptactin蛋白 载量：4mg Twin Strep-tagII蛋白/ml基质 介质微球粒径：45-165um 最大流速：300cm/h
试剂盒已经提供材料：
其他需要自备试剂材料： ² 待纯化蛋白样品； ² 移液器及吸头； ² 去离子水； ² 0.22μm或0.45μm滤膜过滤。 产品储存 储存缓冲液：含20%乙醇的1×PBS 储存温度：2-8℃ 产品使用操作： 1.使用前准备 1）缓冲液的准备 基础缓冲液: 按照实验所用量，取试剂盒中浓缩基础缓冲液，加入9倍体积的去离子水稀释成基础缓冲液； 洗脱液: 按照实验所需用量，取试剂盒中浓缩洗脱液，加入9倍体积的去离子水稀释成洗脱液； 再生液: 按照实验所需用量，取试剂盒中浓缩再生液，加入9倍体积的去离子水稀释成再生液； 缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。 2）样品准备样品 使用上述基础缓冲液制备上样样品（细胞/细菌裂解液），样品在上样前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，防止堵塞柱子。 3）Frdbio® Streptactin Beads 4FF纯化柱的准备 取出试剂盒中预装柱平衡到室温，打开纯化柱底部开关，用3-5个体积去离子水冲洗柱床，随后用5-10个柱床体积基础缓冲液平衡柱子，确保柱床无气泡。 2.从样品中纯化目标蛋白 1）使用蠕动泵上样或者直接上样（重力法）； 上样量不要超过柱子的结合能力。 2）上样完毕后，用基础缓冲液洗掉未结合的杂蛋白，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要10-15个柱体积）； 3）使用洗脱液洗脱目的蛋白，顺次接收并做好标记，直到到紫外吸收监测仪达到一个稳定的基线（一般需要5-10个柱体积）； 4）SDS-PAGE检测分析得到的纯化样品（包括流穿组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品。 3.纯化柱清洗、再生与保存。 1）5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液继续清洗； 2）3倍柱床体积的去离子水清洗； 3）5-10倍柱床体积的0.1M NaOH溶液； 4）3倍柱床体积去离子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。 |
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